BspQI
BspQI-ро дар E. coli ба таври рекомбинантӣ ифода кардан мумкин аст, ки метавонанд сайтҳои мушаххасро эътироф кунанд ва дар зери он истеҳсол карда шаванд.
BspQI, як эндонуклеазаи маҳдудкунандаи эндонуклеазаи IIs, аз штамми рекомбинатии E. coli гирифта шудааст, ки гени клоншуда ва тағирёфтаи BspQI-ро аз Bacillus sphaericus мебарад.Он метавонад сайтҳои мушаххасро эътироф кунад ва пайдарпаии шинохтан ва қитъаҳои ҷудошавӣ инҳоянд:
5' · · · GCTCTTC(N) · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · 5'
Хусусиятҳои маҳсулот
1. Фаъолияти баланд, Ҳазми тез;
2. Фаъолияти пасти ситораҳо, таъмини буридани дақиқ ба монанди “скалпел”;
3. Бе BSA ва аз ҳайвонот озод;
Ҳассосияти метилизатсия
Dметилизатсияи ман:Ҳассос нест;
Dсм метилизатсия:Ҳассос нест;
Метилизатсияи CpG:Ҳассос нест;
Шароити нигоҳдорӣ
Маҳсулот бояд ≤ 0℃ фиристода шавад;Дар ҳолати -25 ~ - 15 ℃ нигоҳ доред.
Буфери нигаҳдорӣ
20mM Tris-HCl, 0,1mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM dithiothreitol, 500 мкг/мл альбумин рекомбинантӣ, 0.1% Trition X- 100 ва 50% глицерол (рН 7,0 @2).
Таърифи воҳид
Як воҳид ҳамчун миқдори ферменте, ки барои ҳазм кардани 1μg ДНК-и назорати дохилӣ дар 1 соат дар 50°C дар ҳаҷми умумии реаксияи 50 мкл зарур аст, муайян карда мешавад.
Назорати сифат
Таҳлили тозагии сафеда (SDS-PAGE):Тозагии BspQI ≥95% тавассути таҳлили SDS-PAGE муайян карда шуд.
RNase:10U BspQI бо 1,6 мкг MS2 РНК дар тӯли 4 соат дар 50 ℃ ҳеҷ таназзулеро, ки тавассути электрофорези гели агароз муайян карда мешавад, ба вуҷуд намеорад.
Фаъолияти ғайримуқаррарии DNase:10U BspQI бо 1μg λ ДНК дар 50℃ дар давоми 16 соат, дар муқоиса бо 50℃ барои 1 соат, ДНК-и зиёдатиро намедиҳад, ки бо электрофорези гели агароз муайян карда мешавад.
Лигатсионӣ ва такрорӣ:Пас аз ҳазми 1 мкг λDNA бо 10U BspQI, пораҳои ДНК метавонанд бо лигаза T4 DNA дар 16ºC пайваст карда шаванд.Ва ин порчаҳои пайвастшударо бо BspQI дубора буридан мумкин аст.
E. coli ДНК: E. coli 16s rDNA хоси TaqMan qPCR ошкор нишон дод, ки бақияи геноми E.coli ≤ 0.1pg/ul аст.
Боқимондаи протеини мизбон:≤ 50 саҳ.м
Бактериявӣ Эндотоксин: Санҷиши LAL, мувофиқи нашри Фармакопеяи IV Чин 2020, усули санҷиши лимити гел, қоидаи умумӣ (1143).Миқдори эндотоксинҳои бактериявӣ бояд ≤10 EU/mg бошад.
Система ва шароитҳои реаксия
| Компонент | Ҳаҷм |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 мкл |
| ДНК | 1 мкг |
| 10 x BspQ I буфер | 5 мкл |
| dd H2O | То 50 мкл |
Шароити реаксия: 50 ℃, Соати 1—16.
Инактивизатсияи гармӣ: 80 ° C барои 20 дақиқа.
Система ва шароити тавсияшудаи реаксия метавонад таъсири нисбатан хуби ҳозимаи ферментро таъмин кунад, ки танҳо барои истинод аст, лутфан барои тафсилот ба натиҷаҳои таҷрибавӣ муроҷиат кунед.
Аризаи маҳсулот
Маҳдудияти ҳозима эндонуклеаза, клонкунии босуръат.
Қайдҳо
1. Њаљми фермент ≤ 1/10 њаљми реаксия.
2. Фаъолияти ситора метавонад вақте ба амал ояд, ки консентратсияи глицерол аз 5% зиёд бошад.
3. Фаъолияти кандашавӣ метавонад вақте ба амал ояд, ки субстрат аз таносуби тавсияшуда камтар аст.
