Протеиназа К (хокаи лиофилизатсияшуда)
Гурба №: HC4500A
Протеиназа К як протеазаи устувори серин бо хусусияти васеи субстрат мебошад.Он бисёр сафедаҳоро дар ҳолати модарӣ ҳатто дар ҳузури маводи шустушӯй вайрон мекунад.Далелҳо аз таҳқиқоти сохтори кристаллӣ ва молекулавӣ нишон медиҳанд, ки фермент ба оилаи субтилизин тааллуқ дорад, ки сегонаи фаъоли каталитикии макон дорад (Asp).39-Ӯ69- Сер224).Ҷои бартаридоштаи тақсимшавӣ пайванди пептидӣ дар ҳамсоягии гурӯҳи карбоксилҳои аминокислотаҳои алифатикӣ ва хушбӯй бо аминокислотаҳои алфа-аминокӣ мебошад.Он одатан барои васеъ истифода мешавадхосият.
Шароити нигоҳдорӣ
Нигаҳдории кӯтоҳмуддат 2-8 ℃, нигоҳдории дарозмуддат -25 ~ -15 ℃.Ҳолати хокаи хушк -25 ~ -15 ℃ барои 3 сол эътибор дорад;хокаи фермент бояд ба хачми дахлдор гудохта шавад.
Мушаххасот
| Намуди зоҳирӣ | Хокаи лиофилизатсияшудаи аморфӣ аз сафед то бесафед |
| Фаъолият | ≥30 У/мг |
| ДНаз | Ҳеҷ кадоме ошкор нашудааст |
| RNase | Ҳеҷ кадоме ошкор нашудааст |
Хосиятҳо
| рақами EC | 3.4.21.64 (Рекомбинант аз албоми Tritirachium) |
| Вазни молекулавӣ | 29 кДа (SDS-PAGE) |
| Нуқтаи изоэлектрикӣ | 7.81 |
| рН оптималӣ | 7.0-12.0 Расми 1 |
| Ҳарорати оптималӣ | 65 ℃ Расми 2 |
| устувории рН | рН 4,5-12,5 (25℃, 16з) Расми 3 |
| Устувории гармидиҳӣ | Поёнтар аз 50℃ (pH 8.0, 30дақ) Расми 4 |
| Фаъолкунандаҳо | SDS, мочевина |
| Ингибиторҳо | фторофосфати диизопропил;фториди фенилметилсульфонил |
Барномаҳо
1. Маҷмӯаи ташхиси генетикӣ
2. Маҷмӯаҳои истихроҷи РНК ва ДНК
3. Истихроҷи ҷузъҳои ғайрипротеин аз бофтаҳо, таназзули ифлосҳои сафеда, аз қабили ваксинаҳои ДНК ва тайёр кардани гепарин
4. Тайёр кардани ДНК-и хромосома тавассути электрофорези импулс
5. Блоти ғарбӣ
6. Реактивҳои альбуминҳои ферментативии гликозилшуда дар ташхиси vitro
Чораҳои эҳтиеткори
Ҳангоми истифода ё вазнкашӣ дастпӯшак ва айнаки муҳофизатӣ пӯшед ва пас аз истифода вентилятсияи хуб нигоҳ доред.Ин маҳсулот метавонад боиси аксуламалҳои аллергии пӯст ва хашми ҷиддии чашм гардад.Агар нафас кашад, он метавонад аллергия ё аломатҳои астма ё нафаскаширо ба вуҷуд орад.Метавонад боиси хашмгинии роҳҳои нафас гардад.
Таҳлил
Таърифи воҳид
Як воҳид (U) ҳамчун миқдори ферменте, ки барои гидролиз кардани казеин барои тавлиди 1 мкмоль тирозин дар як дақиқа дар шароити зерин зарур аст, муайян карда мешавад.
Тайёр кардани реактивҳо
Реагенти I: 1 г казеини шир дар 50 мл маҳлули 0,1 М фосфати натрий (рН 8,0) гудохта, дар об дар ҳарорати 65-70 ℃ барои 15 дақиқа инкубатсия карда, омехта ва гудохт, бо об хунук карда, бо гидроксиди натрий ба рН 8 танзим карда, ҳаҷми собит карда шуд. 100 мл.
Реагенти II: 0,1М кислотаи trichloroacetic, 0,2M натрий ацетати, 0,3M кислотаи уксусӣ.
Реактив III: 0.4M Na2CO3ҳалли.
Реагенти IV: реактиви Форинт бо оби соф барои 5 маротиба маҳлул карда мешавад.
Реагенти V: ҳалкунандаи фермент: маҳлули фосфати натрий 0,1М (рН 8,0).
Реагенти VI: маҳлули тирозин: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 умол/мл тирозин, ки бо 0,2М HCL гудохта шудааст.
Тартиб
1. 0,5 мл реагенти I то 37 ℃ пешакӣ гарм карда мешавад, ба 0,5 мл маҳлули фермент илова кунед, хуб омехта кунед ва дар ҳарорати 37 ℃ барои 10 дақиқа инкубатсия кунед.
2. Барои қатъ кардани реаксия 1 мл реагенти II илова кунед, хуб омехта кунед ва инкубатсияро барои 30 дақиқа идома диҳед.
3. Маҳлули реаксияи центрифугавӣ.
4. 0,5 мл супернатант гиред, 2,5 мл реагенти III, 0,5 мл реагенти IV илова кунед, хуб омехта кунед ва дар ҳарорати 37 ℃ барои 30 дақиқа инкубатсия кунед.
5. ОД660ОД муайян карда шуд1;гурӯҳи назорати холӣ: 0,5 мл реагенти V барои иваз кардани маҳлули фермент барои муайян кардани OD истифода мешавад660ҳамчун ОД2, ΔOD=OD1-ОД2.
6. Каҷи стандарти L-тирозин: 0,5 мл консентратсияи гуногуни маҳлули тирозин, 2,5 мл реагенти III, 0,5 мл реагент IV дар найчаи центрифугаи 5 мл, дар 37 ℃ барои 30 дақиқа инкубатсия кунед, барои OD муайян кунед660барои консентратсияи гуногуни L-тирозин, пас хатти стандартии Y=kX+b ба даст омад, ки дар он Y консентратсияи L-тирозин, X OD аст600.
Ҳисобкунӣ
2: Ҳаҷми умумии маҳлули реаксия (мл)
0,5: Ҳаҷми маҳлули фермент (мл)
0,5: Ҳаҷми моеъи реаксия, ки дар муайянкунии хромогенӣ истифода мешавад (мл)
10: Вақти реаксия (дақ)
Df: Равиши чандкарата
C: Консентратсияи фермент (мг/мл)
Иқтибосҳо
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Летт.(1972), 23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Биофиз.Рес.Коммун.(1971), 44:513.
3. Ҳилз, Ҳ.ва дигарон,Ёвро.J. Биохим.(1975); 56:103–108.
4. Сэмбрук Ҷet ал., Клонкунии молекулавӣ: Дастури лабораторӣ, нашри 2, Лабораторияи баҳори сард, Харбор сард (1989).
Расми 2 Ҳарорати беҳтарин
Реаксия дар буфери 20 mM K-фосфат pH 8.0.Консентратсияи ферментҳо: 1 мг/мл
Расми 3 pH Субот
25℃, 16 соат-табобат бо маҳлули буферии 50mM: pH 4,5-5,5, Ацетат;pH 6,0-8,0, Na-фосфат;pH 8.0-9.0, Tris-HCL.рН 9,0-12,5, Глицин-NaOH.Консентратсияи ферментҳо: 1 мг/мл
Расми 4 Гармӣ субот
30 дақиқа-табобат бо буфери 50mM Tris-HCL, pH 8.0.Консентратсияи ферментҳо: 1 мг/мл
Расми 5 Нигоҳдорӣ устуворty at 25℃
