Протеиназа K NGS (хока)
Гурба №: HC4507A
NGS Protease K як протеазаи устувори серин бо фаъолияти баланди фермент ва хосияти субстрати васеъ мебошад. Фермент ба таври афзалиятнок пайвандҳои эфирӣ ва пайвандҳои пептидро дар наздикии C-терминали аминокислотаҳои гидрофобӣ, аминокислотаҳои аминокислотаҳои сулфур ва аминокислотаҳои хушбӯй таҷзия мекунад.Ҳамин тавр, он аксар вақт барои таназзули сафедаҳо ба пептидҳои кӯтоҳ истифода мешавад.NGS Protease K як протеазаи маъмулии серин бо Asp аст39-Ӯ69-сер224сегонаи каталитикӣ, ки хоси протеазаҳои серин аст ва маркази каталитикӣ бо кашиши Ca иҳота шудааст.2+маконҳои ҳатмӣ барои мӯътадилсозӣ, нигоҳ доштани фаъолияти баланди ферментҳо дар доираи васеи шароит.
Мушаххасот
| Намуди зоҳирӣ | Сафед то бесафед хокаи аморфӣ, лиофилизатсияшуда |
| Фаъолияти мушаххас | ≥40U / мг сахт |
| ДНаз | Ҳеҷ кадоме ошкор нашудааст |
| RNase | Ҳеҷ кадоме ошкор нашудааст |
| Сарбории биологӣ | ≤50CFU/g сахт |
| Боқимондаи кислотаи нуклеинӣ | <5пг/мг сахт |
Хосиятҳо
| Сарчашма | Албоми Tritirachium |
| рақами EC | 3.4.21.64(Рекомбинант аз албоми Tritirachium) |
| Вазни молекулавӣ | 29кДа (SDS-PAGE) |
| Нуқтаи изоэлектрикӣ | 7.81 Расми 1 |
| рН оптималӣ | 7.0-12.0 (Ҳама фаъолияти баландро иҷро мекунанд) Расми 2 |
| Ҳарорати оптималӣ | 65℃ Расми 3 |
| Устувории pH | рН 4,5-12,5 (25℃,16з) Расми 4 |
| Устувории гармидиҳӣ | Зер аз 50℃ (pH 8.0, 30дақ) Расми 5 |
| Устувории нигоҳдорӣ | Дар 25℃ барои 12 моҳ нигоҳ дошта мешавад Fig.6 |
| Фаъолкунандаҳо | SDS, мочевина |
| Ингибиторҳо | фторофосфати диизопропил;фториди бензилсульфонил |
Шароити нигоҳдорӣ
Хокаи лиофилизатсияшударо дар -25 ~ -15 ℃ барои муддати тӯлонӣ дур аз рӯшноӣ нигоҳ доред;Пас аз обшавӣ, аликвотро ба ҳаҷми мувофиқ барои нигоҳдории кӯтоҳмуддат дар 2-8 ℃ дуртар аз рӯшноӣ ё нигоҳдории дарозмуддат дар -25 ~ -15 ℃ дуртар аз рӯшноӣ гузоред.
Чораҳои эҳтиеткори
Ҳангоми истифода ё вазнкашӣ дастпӯшак ва айнаки муҳофизатӣ пӯшед ва пас аз истифода вентилятсияи хуб нигоҳ доред.Ин маҳсулот метавонад боиси аксуламалҳои аллергии пӯст ва хашми ҷиддии чашм гардад.Агар нафас кашад, он метавонад аллергия ё аломатҳои астма ё нафаскаширо ба вуҷуд орад.Метавонад боиси хашмгинии роҳҳои нафас гардад.
Таърифи воҳид
Як воҳиди NGS Protease K ҳамчун миқдори ферменте, ки барои гидролиз кардани казеин ба 1 мкмоль L-тирозин дар шароити муқаррарии стандарт зарур аст, муайян карда мешавад.
Тайёр кардани реактивҳо
| Реактив | Истеҳсолкунанда | Каталог |
| Казеин техникӣаз шири гов | Сигма Олдрих | C7078 |
| NaOH | Химияи SinopharmReagent Co., Ltd. | 10019762 |
| NaH2PO4· 2H2O | Химияи SinopharmReagent Co., Ltd. | 20040718 |
| Na2HPO4 | Химияи SinopharmReagent Co., Ltd. | 20040618 |
| Кислотаи trichloroacetic | Химияи SinopharmReagent Co., Ltd. | 80132618 |
| Ацетат натрий | Химияи SinopharmReagent Co., Ltd. | 10018818 |
| Кислотаи уксусӣ | Химияи SinopharmReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| HCl | Химияи SinopharmReagent Co., Ltd. | 10011018 |
| Карбонати натрий | Химияи SinopharmReagent Co., Ltd. | 10019260 |
| Фолин-фенол | Sangon Biotech (Шанхай)Co., Ltd. | A500467-0100 |
| L-тирозин | Сигма | 93829 |
Реактив I:
Субстрат: 1% казеин аз маҳлули шири гов: 1 г казеини шири говро дар 50 мл маҳлули фосфати натрийи 0,1 М, рН 8,0, дар ванна об дар 65-70 °C барои 15 дақиқа гарм кунед, омехта кунед ва ҳал кунед, бо об хунук кунед, бо усули танзим карда мешавад. гидроксиди натрий то рН 8,0 ва дар он то 100 мл маҳлул кунед.
Реактив II:
Маҳлули TCA: 0,1М кислотаи трихлорассусӣ, 0,2М натрий ацетат ва 0,3М кислотаи уксусӣ (вазни 1,64 г кислотаи трихлорасетитӣ + 1,64 г натрий ацетати + 1,724 мл кислотаи уксусӣ пай дар пай, 50 мл оби деионизатсияшуда илова кунед, то ба H3 0 ҳал кунед ва бо HC0 ҳал кунед. 100 мл).
Реактив III:
0,4 м маҳлули карбонати натрий (вазнаш 4,24 г карбонати натрийи обӣ ва дар 100 мл об ҳал мешавад)
Реактив IV:
Реагенти фенол фолин: 5 маротиба бо оби деионизатсияшуда омехта кунед.
Реактив V:
Молкунандаи фермент: маҳлули фосфати натрий 0,1 М, pH 8,0.
Реагент VI:
Маҳлули стандартии L-тирозин: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol/ml L-тирозин бо 0,2M HCl гудохта шудааст.
Тартиб
1. Спектрофотометри UV-Vis-ро даргиронед ва ченкунии фотометриро интихоб кунед.
2. Дарозии мавҷро ҳамчун 660 нм таъин кунед.
3. Ҳаммоми обро даргиронед, ҳароратро ба 37℃ муқаррар кунед, ҳароратро барои 3-5 дақиқа бетағйир нигоҳ доред.
4. Субстрати 0,5 млро дар найчаи сентрифугаи 2 мл дар ваннаи обии 37℃ барои 10 дақиқа пешакӣ гарм кунед.
5. Маҳлули 0,5 мл маҳлули ферментиро ба найчаи центрифугаи пешакӣ гармшуда барои 10 дақиқа бароред.Маҳлули ферментро ҳамчун гурӯҳи холӣ таъин кунед.
6. Дарҳол пас аз реаксия 1,0 мл реагенти TCA илова кунед.Хуб омехта ва дар ванна об барои 30 дақиқа инкубатсия кунед.
7. Маҳлули реаксияи центрифугавӣ.
8. Ҷузъҳои зеринро бо тартиби муқарраршуда илова кунед.
| Реактив | Ҳаҷм |
| Supernatant | 0,5 мл |
| 0,4 М карбонати натрий | 2,5 мл |
| Реактиви фенол фолин | 0,5 мл |
9. Пеш аз инкубатсия дар ванна об дар ҳарорати 37℃ барои 30 дақиқа хуб омехта кунед.
10. ОД660ОД муайян карда шуд1;гурӯҳи назорати холӣ: ҳалкунандаи фермент барои иваз кардани маҳлули фермент барои муайян кардани OD истифода мешавад660ҳамчун ОД2, ΔOD=OD1-ОД2.
11. Каҷи стандарти L-тирозин: 0,5 мл консентратсияи гуногуни маҳлули L-тирозин, 2,5 мл 0,4 М карбонати натрий, 0,5 мл реагенти фенол фолин дар найчаи центрифугаи 5 мл, дар 37 ℃ барои 30 дақиқа инкубатсия кунед, OD-ро муайян кунед660барои консентратсияи гуногуни L-тирозин, пас каҷи стандартии Y=kX+b ба даст омад, ки дар он Y консентратсияи L-тирозин, X OD аст600.
Ҳисобкунӣ
2: Ҳаҷми умумии маҳлули реаксия (мл)
0,5: Ҳаҷми маҳлули фермент (мл)
0,5: Ҳаҷми моеъи реаксия, ки дар муайянкунии хромогенӣ истифода мешавад (мл)
10: Вақти реаксия (дақ)
Df: Равиши чандкарата
C: Консентратсияи фермент (мг/мл)
Ракамхо
Расми 1 боқимондаи ДНК
| Намуна | авв C4 | Кислотаи нуклеинӣ Барқароршавӣ (пг/мг) | Барқароршавӣ (%) | Ҳамагӣ нуклеинӣ кислота ( пг/мг) |
| ПРК | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | — | — |
| STD1 | 12.955 |
— |
— |
— |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| РНК-и озод H2O | Муайян нашудааст | — | — | — |
Расми 2 РН оптималии
Расми 3 Ҳарорати беҳтарин
Fig.4 Устувории рН
Расми 5 Устувории гармӣ
Fig.6 Устувории нигоҳдорӣ дар 25℃
