ДНаз I

DNase I (Deoxyribonuclease I) як эндодеоксирибонуклеаза аст, ки метавонад ДНК-и яккатор ё дуқабатаро ҳазм кунад.Он пайвандҳои фосфодиэфирҳоро барои тавлиди монодеоксинуклеотидҳо ё олигодеоксинуклеотидҳои якқатор ё дуқатор бо гурӯҳҳои фосфатӣ дар 5′-терминал ва гидроксил дар 3′-терминал эътироф ва ҷудо мекунад.Фаъолияти DNase I аз Ca2+ вобаста аст ва метавонад тавассути ионҳои металлии дувалентӣ ба монанди Mn2+ ва Zn2+ фаъол карда шавад.5 мм Ca2+ ферментро аз гидролиз муҳофизат мекунад.Дар ҳузури Mg2+, фермент метавонад ба таври тасодуфӣ ягон сайтро дар ҳама риштаи ДНК эътироф кунад ва ҷудо кунад.Дар ҳузури Mn2+, риштаҳои дукаратаи ДНК-ро ҳамзамон шинохтан ва тақрибан дар як макон ҷудо кардан мумкин аст, то пораҳои ДНК-и ҳамвор ё порчаҳои ДНК-и часпакро бо 1-2 нуклеотид баромад кунанд.

Амволи маҳсулот

DNase гадуди гови I дар системаи ифодаи хамиртуруш ифода карда шуда, тоза карда шуд.

Cмухолифон

Интиқол ва нигоҳдорӣ

1. Суботи нигаҳдорӣ: - 15 ℃ ~ -25 ℃ барои нигоҳдорӣ;

2.Суботи нақлиёт: Интиқол дар зери бастаҳои ях;

3. Таъминшуда: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl₂, 50% глицерол, pH 7,6 дар 25 ℃.

Таърифи воҳид

Як воҳид ҳамчун миқдори фермент муайян карда мешавад, ки 1 мкг ДНК-и pBR322-ро дар 10 дақиқа дар 37 ° C комилан вайрон мекунад.

Назорати сифат

RNase:5U аз DNase I бо 1,6 мкг MS2 РНК дар давоми 4 соат дар 37 ℃ ҳеҷ таназзуле намедиҳад, ки бо электрофорези гели агароз муайян карда мешавад.

Бактериявӣ Эндотоксин:Санҷиши LAL, мувофиқи нашри Фармакопеяи IV Чин 2020, усули санҷиши лимити гел, қоидаи умумӣ (1143).Миқдори эндотоксинҳои бактериявӣ бояд ≤10 EU/mg бошад.

Дастурҳо барои истифода

1. Маҳлули реаксияро дар найчаи бе RNase мувофиқи таносуби дар поён овардашуда омода кунед:

2,37 ℃ барои 15 дақиқа;

3. Барои қатъ кардани реаксия буфери қатъиро илова кунед ва дар ҳарорати 65℃ барои 10 дақиқа гарм кунед, то DNase I ғайрифаъол карда шавад. Намунаро бевосита барои озмоиши транскрипсияи навбатӣ истифода бурдан мумкин аст.

Қайдҳо

1. 1U DNase I барои як мкг РНК ё 1U DNase I барои камтар аз 1мкг РНК истифода баред.

2.EDTA бояд ба консентратсияи ниҳоии 5 mM илова карда шавад, то РНК-ро аз таназзул ҳангоми ғайрифаъолкунии фермент муҳофизат кунад.