Ultra Nuclease
UltraNuclease як муҳандисии генетикӣ-дендонуклаезест, ки аз Serratia marcescens гирифта шудааст, ки қодир аст ДНК ё РНК-ро вайрон кунад, ё дуқатор ё якқатор, хаттӣ ё даврашакл дар шароити васеъ, кислотаҳои нуклеинро ба 5'-монофосфати олигонуклеотидҳо бо дарозии 5'-монофосфати олигонуклеотидҳо комилан таназзул кунад. .Пас аз тағир додани муҳандисии генетикӣ, маҳсулот дар Escherichia coli (E. coli) ферментатсия, экспрессия ва тоза карда шуд, ки часпакии супернатанти ҳуҷайра ва лизати ҳуҷайраро дар таҳқиқоти илмӣ коҳиш медиҳад, балки инчунин самаранокии тозакунӣ ва таҳқиқоти функсионалии сафедаҳоро беҳтар мекунад.Он инчунин метавонад дар терапияи ген, тозакунии вирус, истеҳсоли ваксина, саноати фармасевтии протеин ва полисахарид ҳамчун реагенти тозакунии кислотаи нуклеинӣ боқимонда истифода шавад.
Хусусиятҳои маҳсулот
| № CAS | 9025-65-4 |
| № EC | |
| Вазни молекулавӣ | 30 кДа |
| Нуқтаи изоэлектрикӣ | 6.85 |
| Тозагии протеин | ≥99%（SDS-PAGE & SEC-HPLC） |
| Фаъолияти мушаххас | ≥1.1 × 106U / мг |
| Ҳарорати оптималӣ | 37°С |
| рН оптималӣ | 8.0 |
| Фаъолияти протеазӣ | манфӣ |
| Сарбории биологӣ | ＜10CFU/100,000U |
| Протеини боқимондаи ҳост-ҳуҷайра | ≤10ppm |
| Метали вазнин | ≤10ppm |
| Эндотоксин бактериявӣ | ＜0,25EU/1000U |
| Буфери нигаҳдорӣ | 20mM Tris-HCl, pH 8.0, 2mM MgCl2, 20mM NaCl, 50% глицерол |
Шароити нигоҳдорӣ
Интиқоли ≤0°C; -25~-15°C Нигаҳдорӣ, 2 сол эътибор дорад (аз яхкунӣ-обшавӣ пешгирӣ кунед).
Таърифи воҳид
Миқдори ферменте, ки барои тағир додани арзиши азхудкунии △A260 ба 1,0 дар давоми 30 дақиқа дар 37 °C, pH 8,0, ки ба ДНК-и 37 мкг ҳазмшудаи лосос бо буридани олигонуклеотидҳо баробар аст, ҳамчун воҳиди фаъол (U) муайян карда шуд.
Назорати сифат
Протеини боқимондаи ҳост-ҳуҷайра: Маҷмӯаи ELISA
•Протеаз Боқимондаҳо: 250KU/mL UltraNuclease бо субстрат дар тӯли 60 дақиқа реаксия кард, ягон фаъолият ошкор нашудааст.
•Эндотоксин бактериявӣ: LAL-Test, Фармакопеяи Ҷумҳурии Мардумии Чин Ҷилди 4 (Нашри 2020) усули санҷиши лимити гел.Қоидаҳои умумӣ (1143).
•Сарбории биологӣ: Фармакопеяи Ҷумҳурии Мардумии Чин Ҷилди 4 (Нашри 2020) — Умумӣ
Қоидаҳои санҷиши стерилият (1101), Стандарти миллии Чин, GB 4789.2-2016.
•Метали вазнин:ICP-AES, HJ776-2015.
Амалиёт
Вақте ки консентратсияи SDS зиёда аз 0,1% ё EDTA буд, фаъолияти UltraNuclease ба таври назаррас коҳиш ёфт
консентратсияи зиёда аз 1 мМ буд. Surfactant Triton X- 100, Tween 20 ва Tween 80 ба нуклеаза таъсире надошт.
Хусусиятҳое, ки консентратсияи он аз 1,5% камтар буд.
| Амалиёт | Амали оптималӣ | Амалиёти дуруст |
| Ҳарорат | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6,0- 11,0 |
| Mg2+ | 1-2мм | 1- 15мм |
| ДТТ | 0 - 100мм | >100мм |
| 2 - Меркаптоэтанол | 0 - 100мм | >100мм |
| Иони металлҳои моновалентӣ (Na+, K+ ва ғ.) | 0-20мм | 0-200мм |
| PO43- | 0- 10мм | 0 - 100мм |
Истифода ва истфода
• Кислотаи экзогении нуклеинро аз маҳсулоти ваксина хориҷ кунед, хатари заҳролудшавии боқимондаи кислотаи нуклеинро коҳиш диҳед ва бехатарии маҳсулотро беҳтар кунед.
• Кам кардани часпакии моеъи ғизо, ки аз кислотаи нуклеин ба вуҷуд омадааст, кӯтоҳ кардани вақти коркард ва баланд бардоштани ҳосили сафеда.
• Кислотаи нуклеинро, ки заррачаи печонидашуда (вирус, ҷисми дохилшаванда ва ғ.), ки ба он мусоидат мекунад, хориҷ кунед.
ба баровардан ва тоза кардани зарра.
| Навъи таҷрибавӣ | Истеҳсоли протеин | Вирус, ваксина | Доруҳои ҳуҷайра |
| Шумораи ҳуҷайраҳо | 1 г ҳуҷайраи вазни тар (бо буфери 10 мл дубора боздошта шудааст) | 1 л ферментатсия супернатант моеъ | 1л маданият |
| Миқдори ҳадди ақал | 250U | 100U | 100U |
| Миқдори тавсияшаванда | 2500U | 25000У | 5000U |
• Табобати нуклеазӣ метавонад ҳалли ва барқароршавии намунаро барои хроматографияи сутун, электрофорез ва таҳлили блтинг беҳтар кунад.
• Дар терапияи генӣ кислотаи нуклеинӣ хориҷ карда мешавад, то вирусҳои тозашудаи адено алоқамандро ба даст оранд.
