Multiplex як қадами RT-qPCR Premix
Тавсифи
Гурба №: HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix маҷмӯаи мултиплексии миқдорӣ ПТР дар асоси РНК ҳамчун қолаб мебошад.Дар таҷриба транскрипсияи баръакс ва ПТР-и миқдорӣ дар як найчаи реаксия анҷом дода мешавад, ки амалиёти таҷрибавиро содда ва хатари олудашавӣ коҳиш медиҳад.Тарҳрезии беназири омехтаи буферӣ ва ферментҳоро метавон дар системаи лиофилизатсияи як қадам истифода бурд.Маҷмӯа Транскриптазаи баръакси ба гармӣ тобоварро барои синтези самараноки риштаи аввал cDNA бо истифода аз hotstart Taq DNA Polymerase барои тақвияти миқдорӣ истифода мебарад.Он дорои буфери реаксияҳои оптимизатсияшуда, омехтаи ферментҳо ва ғайра мебошад ва омилҳое, ки пурқувваткунии ғайримуқаррарии ПТР-ро ба таври муассир бозмедоранд ва самаранокии пурқувваткунии реаксияҳои сершумори qPCR илова карда шудаанд, ки имкон медиҳанд амплификацияи миқдории чандкаратаи флуоресцентӣ ҳангоми таъмини самаранокии пурқувваткунии праймерҳо.
Компонентхо
Ном |
1. Лио-буфер |
2. Омехтаи Lyo-Enzyme |
3. Муҳофизати Lyo |
Ҳолати нақлиётион
A: Lyo-буфер ва муҳофизаткунанда: -25 ~ -15 ℃, мӯҳлати нигоҳдорӣ 1 сол аст.
B: Омехтаи лио-фермент, 2-8 ℃, мӯҳлати нигоҳдорӣ 6 моҳ аст.
Дастурамал барои амалиёт
1. Системаи реаксия (Барои мисол 25μL гиред)
Компонентхо | Ҳаҷм (мкл) | Консентратсияи ниҳоӣ |
Лио-буфер | 6 | 1* |
Омехтаи лио-фермент | 1 | - |
Лио-муҳофизаткунанда | 8 | - |
Омехтаи Primer (10μM) | 1 | 0,1- 1уМ |
Омехтаи зонд (10μM) | 0,5 | 0,05-0,5 мкм |
Шаблон RNA | 5 | - |
DEPC H2O | То 25 | - |
2. Протоколи оптимизатсияшудаи велосипедронӣ
1) Протоколи стандартии велосипедронӣ
Марҳилаи реаксия | Ҳарорат | Вақт | Сикл | |
1 | Транскрипсияи баръакс | 50°Сa | 10мин | 1 |
2 | Денатуратсияи ибтидоӣ | 95°С | 5 дақиқа | 1 |
3 | Реаксияи амплификация | 95°С | 15 сония | 45 давра |
60°Сb | 30 сонияc |
2) Протоколи велосипедронии зуд
| Марҳилаи реаксия | Ҳарорат | Вақт | Сикл |
1 | Транскрипсияи баръакс | 50°Сa | 2мин | 1 |
2 | Денатуратсияи ибтидоӣ | 95°С | 2 сония | 1 |
3 | Реаксияи амплификация | 95°С | 1 сония |
45 давра |
60°Сb | 13 сонияc |
Шарҳ:
a) Баръакс транскрипция: Ҳарорат метавонад 42°C ё 50°C-ро барои 10-15 дақиқа интихоб кунад.
b) Реаксияи амплификация: Ҳарорат мувофиқи арзиши Tm примерҳои тарҳрезишуда танзим карда мешавад.
в)Флуоресцентсия сигнал ба даст овардан: Лутфан тартиби озмоиширо мувофиқи талаботидастури асбоб.
Маълумоти техникӣ / Мушаххасоти
Оғози гарм | Оғози гарми дарунсохт |
Усули ошкор | Муайянкунии праймер-зонд |
Усули PCR | Як қадами RT-qPCR |
Навъи намуна | РНК |
Қайдҳо
1. Ин маҳсулот танҳо барои тадқиқот аст.
2. Лутфан, барои таъмини саломатӣ ва бехатарии худ, либоси шахсии шахсии зарурӣ, аз қабили халтаҳои лабораторӣ ва дастпӯшакҳоро пӯшед!