Ранс А
Рибонуклеаза А (RNaseA) як полипептиди якқатор аст, ки дорои 4 пайванди дисульфидӣ бо вазни молекулавии тақрибан 13,7 кДа мебошад.RNase A як эндорибонуклеаза аст, ки махсусан РНК-и якқаторро дар пасмондаҳои C ва U вайрон мекунад.Махсусан, ҷудошавӣ пайванди фосфодиэстериро, ки аз 5′-рибозаи нуклеотид ва гурӯҳи фосфатҳо дар 3′-рибозаи нуклеотиди пиримидини ҳамсоя ба вуҷуд омадаанд, эътироф мекунад, то фосфатҳои 2, 3′-сиклӣ ба гидролизҳои мувофиқ ′фосфатҳои нуклеозидҳо (масалан, pG-pG-pC-pA-pG аз ҷониби RNase A ҷудо карда мешавад, то pG-pG-pCp ва A-PG тавлид кунад).RNase A дар ҷудо кардани РНК-и якқатор фаъолтарин аст.Консентратсияи кории тавсияшаванда 1-100μГ/мл аст, ки бо системаҳои гуногуни реаксия мувофиқ аст.Консентратсияи пасти намак (0-100 mM NaCl) метавонад барои буридани РНК-и якқатор, РНК-и дуқатор ва занҷирҳои РНК, ки дар натиҷаи гибридизатсияи РНК-ДНК ба вуҷуд омадаанд, истифода шавад.Аммо, дар консентратсияи баланди намак (≥0,3 М), RNase A танҳо РНК-и якқаторро ҷудо мекунад.
RNase A маъмулан барои тоза кардани РНК ҳангоми тайёр кардани ДНК плазмидӣ ё ДНК-и геномӣ истифода мешавад. Новобаста аз он ки DNase дар ҷараёни омодагӣ фаъол аст ё не, метавонад ба реаксия ба осонӣ таъсир расонад.Усули анъанавии ҷӯшондан дар ванна об метавонад барои ғайрифаъол кардани фаъолияти DNase истифода шавад.Ин маҳсулот дорои DNase ва протеаз нест ва пеш аз истифода коркарди гармиро талаб намекунад.Илова бар ин, ин маҳсулот инчунин метавонад дар таҷрибаҳои биологияи молекулавӣ, ба монанди таҳлили муҳофизати RNase ва таҳлили пайдарпаии РНК истифода шавад.
Шароити нигоҳдорӣ
Маҳсулотро дар ҳарорати -25～-15℃ нигоҳ доштан мумкин аст, эътибораш 2 сол.
Дастурҳо
Ин яке аз усулҳои маъмул барои омода кардани маҳлули нигаҳдории RNase A мебошад.Он инчунин метавонад аз ҷониби омода карда шавадусулҳои дигар мувофиқи усулҳои анъанавӣ дар лаборатория ё адабиёти маълумотӣ (масаланбевосита дар 10 мм Tris-HCl, pH 7.5 ё маҳлули Tris-NaCl гудохта мешавад)
1. Барои тайёр кардани 10 мг/мл маҳлули нигоҳдории RNase A 10 мм ацетати натрийро (рН 5,2) истифода баред
2. Гарм кардан дар 100 ℃ барои 15 дақиқа
3. То ҳарорати хонагӣ хунук кунед, 1/10 ҳаҷми 1 М Tris-HCl (pH 7,4) илова кунед, рН-и онро ба 7,4 танзим кунед (барои).масалан, 500 мл маҳлули нигоҳдории 10г/мл RNase 1M Tris-HCL, PH7.4 илова кунед)
4. Дар -20℃ барои нигаҳдории яхкардашуда, ки метавонад то 2 сол устувор бошад.
[Эзоҳ]: Ҳангоми ҷӯшонидани маҳлули RNaseA дар шароити бетараф боришоти RNase ба вуҷуд меояд;Онро дар сатҳи пасти рН ҷӯшонед ва агар боришот вуҷуд дошта бошад, онро мушоҳида кардан мумкин аст, ки метавонад аз мавҷудияти ифлосҳои сафеда бошад.Агар пас аз ҷӯшидани таҳшин пайдо шавад, ифлосиҳо метавонанд тавассути центрифугаи баландсуръат (13000 rpm) тоза карда шаванд ва сипас барои нигоҳдории яхбандӣ зербанд карда шаванд.
Маълумоти маҳсулот
| Синонимҳо | Рибонуклеаза I;рибонуклеазаи гадуди зери меъда;Рибонуклеаза 3'-пиримидноолигонуклеотидохидролаза;Rnase A;Эндорибонулцеаз I |
| № CAS | 9001-99-4 |
| Намуди зоҳирӣ | Хокаи лиофилизатсияшудаи сафед |
| Вазни молекулавӣ | ~ 13,7 кДа (пайванди кислотаи аминокислотаҳо) |
| Арзиши Ph | 7.6 (диапазони фаъолият 6-10) |
| Ҳарорати мувофиқ | 60 ℃ (Фаъолият 15-70 ℃) |
| Агенти фаъолкунанда | Na2+.К+ |
| Ингибитор | Ингибитори Rnase |
| Усули ғайрифаъолкунӣ | Бо гармкунӣ ғайрифаъол карда намешавад, тавсия дода мешавад, ки сутуни центрифугаро истифода баред |
| Пайдоиши | гов |
| Ҳалшавандагӣ | Дар об ҳалшаванда (10 мг/мл) |
| Талафоти хушк | ≤5,0% |
| Фаъолияти фермент | ≥60 воҳиди Куниц/мг |
| Нуқтаи изоэлектрикӣ | 9.6 |
Қайдҳо
Барои бехатарӣ ва саломатии худ, лутфан куртаҳои лабораторӣ ва дастпӯшакҳои якдафъаинаро барои амалиёт пӯшед.
