Universal Premix SYBR GREEN qPCR (кабуд)

Гурба №: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) як ҳалли пешакии 2 × амплификатсияи миқдории PCR дар вақти воқеӣ мебошад, ки бо ҳассосият ва хосияти баланд тавсиф мешавад, ранги кабуд дорад ва таъсири пайгирии иловаи намуна дорад.Компоненти аслии Taq DNA polymerase оғози гарми антителоро истифода мебарад, то амплификацияи ғайримуқаррариро бо сабаби пошидани праймер ҳангоми тайёр кардани намуна ба таври муассир пешгирӣ кунад.Ҳамзамон, формула омилҳои мусоидаткунандаро барои баланд бардоштани самаранокии пурқувваткунии реаксияи PCR ва баробар кардани амплификацияи генҳо бо мазмуни гуногуни GC (30 ~ 70%) илова мекунад, то ПЗР-и миқдорӣ дар миқдори васеи миқдорӣ муносибати хуби хатиро ба даст орад. вилоят.Ин маҳсулот дорои ранги махсуси ROX Passive Reference Dye мебошад, ки ба аксари асбобҳои qPCR мувофиқ аст.Консентратсияи ROX-ро дар асбобҳои гуногун танзим кардан лозим нест.Барои тайёр кардани системаи реаксия барои пурзӯрсозӣ, танҳо илова кардани праймерҳо ва қолибҳо лозим аст.

Компонентхо

Universal Blue qPCR Master Mix

Шароити нигоҳдорӣ

Маҳсулот бо бастаҳои ях фиристода мешавад ва мумкин аст дар -25 ℃ ~ -15 ℃ барои 18 моҳ нигоҳ дошта шавад.Ҳангоми нигоҳдорӣ ё омода кардани системаи реаксия аз шуоъҳои сахти рӯшноӣ канорагирӣ кардан лозим аст.

Мушаххасот

Дастурҳо

1.Системаи реаксия

[Эзоҳ]: Пеш аз истифода бодиққат омехта кунед, то аз ларзиши шадид футури аз ҳад зиёдро пешгирӣ кунед.

a) Консентратсияи праймер: Консентратсияи ниҳоии праймер 0,2 мкмоль/л аст ва инчунин метавонад аз 0,1 то 1,0 мкмоль/л мувофиқ бошад.

б) Консентратсияи қолаб: Агар қолаб маҳлули саҳҳомии cDNA-и ҳалнашуда бошад, ҳаҷми истифодашуда набояд аз 1/10 ҳаҷми умумии реаксияи qPCR зиёд бошад.

в) Маҳлули қолабӣ: Тавсия дода мешавад, ки маҳлули захираи cDNA-ро 5-10 маротиба ҳал кунед.Миқдори оптималии қолаби иловашуда беҳтар аст, вақте ки арзиши Ct, ки тавассути тақвият ба даст омадааст, 20-30 давра аст.

г) Системаи реаксия: Тавсия дода мешавад, ки 20μL ё 50μL барои таъмини самаранокӣ ва такроршавандагии амплификацияи генҳои мақсаднок истифода шавад.

д) Омодасозии система: Лутфан дар курсии хеле тоза омода кунед ва маслиҳатҳо ва найҳои реаксияро бе пасмондаи нуклеаза истифода баред;тавсия дода мешавад, ки маслиҳатҳоро бо картриджҳои филтр истифода баред.Аз ифлосшавии салиб ва ифлосшавии аэрозол худдорӣ намоед.

2.Барномаи реаксия

Барномаи стандартӣ

Барномаи зуд

[Эзоҳ]: Барномаи зуд барои аксарияти генҳо мувофиқ аст ва барномаҳои стандартиро барои генҳои сохтори дуввуми мураккаби инфиродӣ санҷидан мумкин аст.

a) Ҳарорат ва вақти коркард: Лутфан мувофиқи дарозии праймер ва гени мақсаднок танзим кунед.

б) Гирифтани сигнали флуоресцентӣ (★): Лутфан тартиби таҷрибавиро мувофиқи талаботи дастурҳои истифодабарии асбоб муқаррар кунед.

в) Каҷи обшавӣ: Барномаи пешфарзии асбобро одатан метавон истифода бурд.

3. Таҳлили натиҷаҳо 

Барои таҷрибаҳои миқдорӣ ҳадди аққал се нусхаи биологӣ лозим буд.Пас аз реаксия, каҷи пурқувват ва обшавии обро тасдиқ кардан лозим аст.

3.1 Каҷи пурқувват:

Каҷи стандартии тақвияти S-шакл аст.Таҳлили миқдорӣ вақте дақиқтар аст, ки арзиши Ct аз 20 то 30 афтад. Агар арзиши Ct аз 10 камтар бошад, қолабро ҳал кардан ва санҷишро дубора гузаронидан лозим аст.Вақте ки арзиши Ct дар байни 30-35 аст, зарур аст, ки консентратсияи шаблон ё ҳаҷми системаи реаксияро зиёд кунед, то самаранокии пурқувватро беҳтар созед ва дақиқии таҳлили натиҷаҳоро таъмин кунед.Вақте ки арзиши Ct аз 35 зиёд аст, натиҷаҳои санҷиш ифодаи генро ба таври миқдорӣ таҳлил карда наметавонанд, аммо метавонанд барои таҳлили сифатӣ истифода шаванд.

3.2 Каҷи обшавии:

Қуллаи ягонаи хатти обшавӣ нишон медиҳад, ки хосияти реаксия хуб аст ва таҳлили миқдорӣ имконпазир аст;агар каљи обшавии ќуллањои дукарата ё якчанд маротиба нишон дода шавад, тањлили миќдорї гузаронида намешавад.Каҷи обшавии қуллаҳои дукаратаро нишон медиҳад ва бояд муайян кард, ки қуллаи ғайримақсаднок димери праймер аст ё амплификацияи ғайримахсус тавассути электрофорези гели агарози ДНК.Агар он як димери праймер бошад, тавсия дода мешавад, ки консентратсияи праймерро кам кунед ё праймерҳоро бо самаранокии баландбардорӣ аз нав тарроҳӣ кунед.Агар он амплификацияи ғайримуқаррарӣ бошад, лутфан ҳарорати гармкуниро зиёд кунед ё праймерҳоро бо хусусият аз нав тарҳрезӣ кунед.

Қайдҳо

Лутфан, барои таъмини саломатӣ ва бехатарии худ таҷҳизоти зарурии PPE, аз қабили лабораторӣ ва дастпӯшакҳоро пӯшед!

Ин маҳсулот ТАНҲО барои истифодаи тадқиқотӣ аст!