Робустарт Так ДНК Полимераза

Robustart Taq DNA Polymerase як полимеразаи гарми ДНК мебошад.Ин маҳсулот на танҳо метавонад реаксияи ғайримуқаррариро, ки дар натиҷаи коркарди ғайримуқаррарии праймерҳо ё ҷамъшавии праймерҳо дар раванди омодасозӣ ва тақвияти системаи ПТР ба вуҷуд омадааст, боздорад.Аз ин рӯ, он хусусияти аъло дорад ва барои тақвияти қолибҳои консентратсияи паст самараноктар аст ва барои реаксияи амплификацияи мултиплексии PCR мувофиқ аст.Ғайр аз он, ин маҳсулот қобили татбиқи хеле хуб дорад ва дар намудҳои гуногуни реаксияҳои PCR натиҷаҳои устувори амплификация ба даст овардан мумкин аст.

Компонентхо

1.5 U/μL Robustart Taq ДНК полимераза

2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ озод) (ихтиёрӣ)

3.25 мм MgCl₂(ихтиёрӣ)

* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ free) дорои dNTP ва Mg²+ нест, лутфан dNTPs ва MgCl илова кунед₂хангоми тайёр кардани системаи реакция.

Барномаҳои тавсияшуда

1.Афзоиши зуд.

2.Амплификацияи чандкарата.

3.Амплификацияи мустақими хун, тампонҳо ва дигар намунаҳо.

4.Муайян кардани бемориҳои роҳи нафас.

Ҳолати нигоҳдорӣ

-20°C барои нигоҳдории дарозмуддат, бояд пеш аз истифода хуб омехта карда шавад, аз яхкунӣ ва обшавии зуд-зуд канорагирӣ кунед.

*Агар пас аз яхдон боришот рух диҳад, ин муқаррарӣ аст;тавсия дода мешавад, ки пеш аз омехта кардан ва истифода бурдан ба ҳарорати хонагӣ баробар карда шавад.

Таърифи воҳид

Як воҳиди фаъол (U) ҳамчун миқдори ферменте муайян карда мешавад, ки 10 нмол дезоксирибонуклеотидро ба маводи дар кислотаҳо ҳалнашаванда дар 74°C дар тӯли 30 дақиқа бо истифода аз ДНК-и фаъолшудаи лососӣ ҳамчун қолаб/праймер дохил мекунад.

Назорати сифат

1.тозагии электрофорезии SDS-PAGE зиёда аз 98%.

2.Ҳассосияти амплификация, назорати партия ба партия, устуворӣ.

3.Фаъолияти экзогении нуклеаза, ифлосшавии экзогении эндонуклеаза ё экзонуклеаза вуҷуд надорад

Дастурҳо

Танзимоти реаксия

Эзоҳҳо:

1) а.Буфер дорои dNTP ва Mg²+ нест, лутфан dNTPs ва MgCl илова кунед₂хангоми тайёр кардани системаи реакция.

2) б.Агар барои qPCR/qRT-PCR истифода шавад, зондҳои флуоресцентӣ бояд ба системаи реаксия илова карда шаванд.Одатан, консентратсияи ниҳоии ибтидоии 0,2 μM натиҷаҳои хуб медиҳад;агар реаксия суст бошад, консентратсияи праймерро дар доираи 0,2-1 мкМ танзим кардан мумкин аст.Консентратсияи зонд одатан дар доираи 0,1-0,3 мкм оптимизатсия карда мешавад.Таҷрибаҳои градиентии консентратсиониро метавон барои дарёфти беҳтарин омезиши праймер ва зонд анҷом дод.

Протоколи гардиши гармидиҳӣ

Қайдҳо

1.Суръати амплификацияи полимеразаи тези ДНК набояд аз 1 кб/10 с камтар бошад.Сатҳи баландшавӣ ва пастшавии ҳарорат, режими назорати ҳарорат ва самаранокии гармии асбобҳои гуногуни PCR хеле фарқ мекунад, аз ин рӯ тавсия дода мешавад, ки шароити реаксияи оптималии асбоби мушаххаси PCR-ро оптимизатсия кунед.

2.Система хеле мутобиқшаванда буда, хусусият ва ҳассосияти баланд дорад.

3.Муносиб барои истифода ҳамчун реагентҳои муайянкунии PCR-и ҳассосияти баланд ва мумкин аст дар реаксияҳои мултиплексии ПЗР истифода шавад.

4.Фаъолияти 5′→3′ полимераз, 5′→3′ фаъолияти экзонуклеаза;фаъолияти экзонуклеазаи 3'→5' нест;функсияи корректорӣ вуҷуд надорад.

5.Муносиб барои санҷиши сифатӣ ва миқдорӣ PCR ва RT-PCR.

6.3'-охири маҳсулоти PCR A мебошад, ки онро мустақиман ба вектори Т клон кардан мумкин аст.

7.Усули се марҳила барои праймерҳо бо ҳарорати пасти гармкунӣ ё барои тақвияти порчаҳои аз 200 бит зиёдтар тавсия дода мешавад.