RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Ин маҳсулот дорои буфери реаксия, RT-Enzymes Mix (полимеразаи Bst DNA ва транскриптазаи баръакс ба гармӣ), Муҳофизати лиофилизатсияшуда ва ҷузъҳои рангҳои хромогенӣ мебошад.Барои истифода танҳо Буферро истифода баред, ферментҳои реаксия ва праймер омехта карда, ба қолаб илова карда мешаванд;илова кардани муҳофизаткунандаи лиофилизатсияшуда метавонад рост бошад.Он ба лиофилизатор пайваст ва лиофилизатсия карда шуд ва ҳангоми истифода танҳо праймерҳо ва қолибҳо илова карда шуданд.Ин маҷмӯа зуд ва равшани визуалии пурқувватро таъмин мекунад, ки аксуламали манфӣ бо ранги сурх ва аксуламали мусбат бо тағирёбии зард нишон дода мешавад.
Компонент
| Компонент | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Буфери пурқувваткунандаи миёнаравӣ (бо ранг) | 0,96 мл | 4,80 мл×2 | 9,60 мл×10 |
| RT-Enzymes Mix | 270 мкл | 2,70 мл | 2,70 мл × 10 |
| Муҳофизати лиофилизатсияшуда | 0,96 мл × 2 | 9,60 мл × 2 | 9,60 мл×20 |
Барномаҳо
Барои амплификацияи изотермикии ДНК ё РНК.
Шароити нигоҳдорӣ
Бо яхи хушк интиқол дода мешавад, дар -25 ~ -15 ℃ нигоҳ дошта мешавад.Аз обшавии зуд-зуд худдорӣ намоед, маҳсулот барои 12 моҳ эътибор дорад.
Протокол
1.Буфери реаксияро, ки дар ҳарорати хонагӣ истифода мешавад, об кунед.Ба таври мухтасар найҳоро гирдоб кунед ё чанд маротиба гардон кунед, то бодиққат омехта кунед, сипас центрифуга кунед, то моеъро дар қаъри қубур ҷамъ кунед.
2.Омодасозии системаи реаксия.Ин реагентро дар ду системаи реаксия, омехтаи реаксияи моеъ ва омехтаи системаи лиофилизатсияшуда омода кардан мумкин аст.
1) Омезиши реаксияи моеъро омода кунед
| Компонент | Ҳаҷм |
| Буфери пурқувваткунандаи миёнаравӣ (бо ранг) | 10 мкл |
| RT-Enzymes Mix | 2,8 мкл |
| 10 × омехтаи Primera | 5 мкл |
| Шаблонҳои ДНК/РНК b | × мкл |
| Оби бенуклеаз | То 50 мкл |
2) Омехтаи системаи лиофилизатсия
① Омезиши лиофилизатсияшуда тайёр кунед
| Компонент | Ҳаҷм |
| Буфери пурқувваткунандаи миёнаравӣ (бо ранг) | 10 мкл |
| Муҳофизати лиофилизатсияшуда | 20 мкл |
| RT-Enzymes Mix | 2,8 мкл |
| Оби бенуклеаз | То 50 мкл |
② Лиофилизатсия: Омехтаи омодашуда дар системаи 50μL лиофилизатсия карда шуд
③ Омезиши реаксияро омода кунед
| Компонент | Ҳаҷм |
| Омехтаи лиофилизатсияшуда | 1 дона |
| 10 × омехтаи Primera | 5 мкл |
| Шаблонҳои ДНК/РНК b | × мкл |
| Оби бенуклеаз | То 50 мкл |
Эзоҳҳо:
1) а.10 × Омехтаи Primer: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) б.DEPC (об ҳалшаванда) барои templ кислотаи нуклеин тавсия дода мешавад.
1.Дар 65°C барои 30-45 дақиқа инкубатсия кунед, ки онро мувофиқи вақти тағирёбии ранг ба таври мувофиқ дароз кардан мумкин аст.
2.Аз руи чашми оддй зард мусбат ва сурх манфй буд.
Қайдҳо
1.Намак метавонад дар қаъри найчаи буферӣ пайдо шавад, найҳоро ба таври мухтасар гирд оваред ё чанд маротиба гардон кунед, то дар ҳарорати хона ҳамаҷониба омехта шавад.
2.Ҳарорати реаксияро мувофиқи ҳолати праймерҳо аз 62 ℃ то 68 ℃ оптимизатсия кардан мумкин аст.
3.Реагентҳои бастабандишуда набояд муддати тӯлонӣ ба ҳаво дучор шаванд.
4.Реаксияи ранги сурх ва зард аз тағирёбии рН системаи реаксия вобаста аст, лутфан маҳлули нигоҳдории кислотаи нуклеини Трисро истифода набаред, ки барои истифодаи ddH тавсия дода мешавад.2O кислотаи нуклеинӣ захирашуда;
5.Таҷриба бояд стандартизатсия карда шавад, аз ҷумла омодасозии системаи реаксия, лиофилизатсия ва коркарди намуна ва раванди илова кардани намуна;
6.Барои пешгирӣ кардани ифлосшавӣ, тавсия дода мешавад, ки системаи реаксияро дар як курсии ултра тоза омода созед, дар дигар ҷойҳо Шаблонҳоро ба қуттии дуди ҳуҷра илова кунед, то дахолати мусбати бардурӯғ пешгирӣ карда шавад.
