Warm Start Bst 2.0 DNA Polymerase (Глицерол ройгон)

Bst DNA polymerase V2 аз Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I гирифта шудааст, ки дорои фаъолияти 5′→3′ полимеразаи ДНК ва фаъолияти қавии ивазкунии занҷир, аммо фаъолияти 5′→3′ экзонуклеаза надорад.Bst DNA Polymerase V2 барои ҷобаҷогузории ришта, амплификацияи изотермикии LAMP (Ampplification mediated isothermal loop) ва пайдарпайии зуд мувофиқ аст.Bst DNA polymerase V2 як версияи гарми оғозшуда дар асоси Bst DNA polymerase V2 (HC5005A) мебошад, ки бо технологияи тағирёбанда ба даст оварда шудааст, ки метавонад фаъолияти полимерази ДНК-ро дар ҳарорати хонагӣ боздорад, аз ин рӯ системаи реаксияро дар ҳарорати хонагӣ идора кардан ва таҳия кардан мумкин аст, то пешгирӣ аз бефосила -афзоиши мушаххас ва баланд бардоштани самаранокии реаксия ва ин версияро метавон лиофилизатсия кард.Илова бар ин, фаъолияти он дар ҳарорати баланд бароварда мешавад, бинобар ин барои қадами алоҳидаи фаъолсозӣ лозим нест.

Компонентхо

Bst ДНК полимераз V2 (Бе глицерин) (8U/μL)

Барномаҳо

1.Амплификацияи изотермикии LAMP

2.Реаксияи ҷобаҷогузории ягонаи риштаи ДНК

3.пайдарпаии генҳои GC баланд

4.пайдарпайии ДНК сатҳи нанограмма.

Ҳолати нигоҳдорӣ

Интиқол дар зери 0 ° C ва дар -25 ° C ~ -15 ° C нигоҳ дошта мешавад.

Таърифи воҳид

Як воҳид ҳамчун миқдори ферменте муайян карда мешавад, ки дар давоми 30 дақиқа дар ҳарорати 65 ° C 25 нмол dNTP-ро ба маводи ҳалнашавандаи кислота дохил мекунад.

Назорати сифат

1.Таҳлили тозагии сафеда (SDS-PAGE):Покии Bst DNA polymerase V2 ≥99% бо таҳлили SDS-PAGE бо истифода аз Detection Coomassie Blue муайян карда мешавад.

2.EнонуклеазаФаъолият:Инкубатсияи реаксияи 50 мкл, ки дорои ҳадди аққал 8 U аз Bst DNA полимераза V2 бо 1 мкг λDNA дар давоми 16 соат дар 37 ℃ боиси таназзули муайяншаванда мегардад.

3.Фаъолияти экзонуклеаза:Инкубатсияи реаксияи 50 мкл, ки дорои ҳадди аққал 8 U полимеразаи Bst DNA V2 бо 1 мкг λ -Hind Ⅲ ҳазми ДНК дар тӯли 16 соат дар 37 ℃ боиси таназзули ошкоршаванда нест, тавре ки муайян шудааст.

4.Фаъолияти Nickase:Инкубатсияи реаксияи 50 мкл, ки дорои ҳадди аққал 8 U полимеразаи Bst DNA V2 бо 1 мкг pBR322 DNA дар давоми 16 соат дар 37°C боиси таназзули муайяншаванда мегардад.

5.Фаъолияти RNase:Инкубатсияи реаксияи 50 мкл, ки дорои ҳадди аққал 8 U полимеразаи Bst DNA V2 бо 1,6 мкг MS2 RNA дар давоми 16 соат дар 37°C боиси таназзули ошкоршаванда мегардад, тавре муайян карда шудааст.

6.E. coliДНК:120 U аз Bst DNA polymerase V2 барои мавҷудияти ДНК-и геномии E. coli бо истифода аз TaqMan qPCR бо праймерҳои мушаххас барои макони E. coli 16S rRNA тафтиш карда мешавад.Ифлосшавии ДНК-и геномии E. coli ≤1 Нусха аст.

Реаксияи LAMP

Эзоҳҳо:

1) а.SYTOTM 16 Green (25×): Мувофиқи ниёзҳои таҷрибавӣ, рангҳои дигар метавонанд ҳамчун ивазкунанда истифода шаванд;

2) б.Омехтаи ибтидоӣ: бо омехта кардани 20 μ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB ва ҳаҷмҳои дигар ба даст оварда шудааст.

Реаксия ва шароит

1 × HC Bst V2 Buffer, ҳарорати инкубатсия аз 60°C то 65°C аст.

Инактиватсияи гармӣ

 80°C, 20 дақиқа