Bst 2.0 ДНК полимераза (глицерол ройгон)
Bst DNA polymerase V2 аз Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I гирифта шудааст, ки дорои фаъолияти 5′→3′ полимеразаи ДНК ва фаъолияти қавии ивазкунии занҷир, аммо фаъолияти 5′→3′ экзонуклеаза надорад.Bst DNA Polymerase V2 барои ҷобаҷогузории ришта, амплификацияи изотермикии LAMP (Ampplification mediated isothermal loop) ва пайдарпайии зуд мувофиқ аст.
Компонентхо
| Компонент | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (Озод глицерин) (8U/μL) | 0,2 мл | 1 мл | 10 мл |
| Буфери 10×HC Bst V2 | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 3×10 мл |
| MgSO4(100мм) | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 2×10 мл |
Барномаҳо
1.Чароғбандии изотермикӣ
2.Раксияи ягонаи ҷобаҷогузории риштаи ДНК
3.Секвенсияи генҳои баланди GC
4.Секвенсияи ДНК сатҳи нанограмма.
Ҳолати нигоҳдорӣ
Интиқол дар зери 0 ° C ва дар -25 ° C ~ -15 ° C нигоҳ дошта мешавад.
Таърифи воҳид
Як воҳид ҳамчун миқдори ферменте муайян карда мешавад, ки дар давоми 30 дақиқа дар ҳарорати 65 ° C 25 нмол dNTP-ро ба маводи ҳалнашавандаи кислота дохил мекунад.
Назорати сифат
1.Таҳлили тозагии сафеда (SDS-PAGE):Покии Bst DNA polymerase V2 ≥99% бо таҳлили SDS-PAGE бо истифода аз Detection Coomassie Blue муайян карда мешавад.
2.Фаъолияти экзонуклеаза:Инкубатсияи реаксияи 50 мкл, ки дорои ҳадди аққал 8 U полимеразаи Bst DNA V2 бо 1 мкг λ -Hind Ⅲ ҳазми ДНК дар тӯли 16 соат дар 37 ℃ боиси таназзули ошкоршаванда нест, тавре ки муайян шудааст.
3.Фаъолияти Nickase:Инкубатсияи реаксияи 50 мкл, ки дорои ҳадди аққал 8 U полимеразаи Bst DNA V2 бо 1 мкг pBR322 DNA дар давоми 16 соат дар 37°C боиси таназзули муайяншаванда мегардад.
4.Фаъолияти RNase:Инкубатсияи реаксияи 50 мкл, ки дорои ҳадди аққал 8 U полимеразаи Bst DNA V2 бо 1,6 мкг MS2 RNA дар давоми 16 соат дар 37°C боиси таназзули ошкоршаванда мегардад, тавре муайян карда шудааст.
5.ДНК E. coli:120 U аз Bst DNA polymerase V2 барои мавҷудияти ДНК-и геномии E. coli бо истифода аз TaqMan qPCR бо праймерҳои мушаххас барои макони E. coli 16S rRNA тафтиш карда мешавад.Ифлосшавии ДНК-и геномии E. coli ≤1 Нусха аст.
Реаксияи LAMP
| Компонентхо | 25мкЛ |
| Буфери 10×HC Bst V2 | 2,5 мкл |
| MgSO4 (100мм) | 1,5 мкл |
| dNTPs (ҳар кадомаш 10 мм) | 3,5 мкл |
| SYTO™ 16 Сабз (25×)a | 1,0 мкл |
| Омехтаи праймерb | 6 мкл |
| Bst DNA Polymerase V2 (Беглицерин) (8 U/uL) | 1 мкл |
| Шаблон | × мкл |
| ddH₂O | То 25 мкл |
Эзоҳҳо:
1) а.SYTOTM 16 Green (25×): Мувофиқи ниёзҳои таҷрибавӣ, рангҳои дигар метавонанд ҳамчун ивазкунанда истифода шаванд;
2) б.Омехтаи ибтидоӣ: бо омехта кардани 20 μ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB ва ҳаҷмҳои дигар ба даст оварда шудааст.
Реаксия ва шароит
1 × HC Bst V2 Buffer, ҳарорати инкубатсия аз 60°C то 65°C аст.
Инактиватсияи гармӣ
80 °C, 20 дақиқа
