Hotstart Taq DNA Polymerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (модификатсияи антитело) як полимеразаи гарм-сари термостабли ДНК аз Thermus aquaticus YT-1 мебошад, ки дорои фаъолияти 5'→3' полимераз ва фаъолияти эндонуклеазаи 5' флап мебошад.Полимеразаи гарми Taq DNA як полимеразаи Taq DNA мебошад, ки аз ҷониби антителоҳои thermolabile Taq тағир дода шудааст.Тағйир додани антитело хосият, ҳассосият ва ҳосили ПЗР-ро афзоиш дод.
Компонентхо
| Компонент | HC1012А-01 | HC1012А-02 | HC1012А-03 | HC1012А-04 |
| 5 × HC Taq буфери | 4×1 мл | 4×10 мл | 4×50 мл | 5×400 мл |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (Антитело тағир дода шудааст) (5 U/μL) | 0,1 мл | 1 мл | 5 мл | 10×5 мл |
Барномаҳо
10 мм Tris-HCl (pH 7,4 дар 25℃), 100 мм KCl, 0,1 мм EDTA, 1 мм дитиотреитол, 0,5% Tween20, 0,5% IGEPALCA-630 ва 50% глицерол.
Ҳолати нигоҳдорӣ
Интиқол дар зери 0 ° C ва дар -25 ° C ~ -15 ° C нигоҳ дошта мешавад.
Таърифи воҳид
Як воҳид ҳамчун миқдори ферменте муайян карда мешавад, ки дар давоми 30 дақиқа дар ҳарорати 75 ° C 15 нмол dNTP-ро ба маводи ҳалнашавандаи кислота дохил мекунад.
Назорати сифат
1.EndФаъолияти онуклеаз:Инкубатсияи 20 U фермент бо 4 мкг pUC19 ДНК дар тӯли 4 соат дар 37℃ боиси таназзули ошкоршавандаи ДНК, тавре ки тавассути электрофорези гел муайян карда шудааст, оварда нашудааст.
2.5 кб Lambda PCR:25 давраҳои пурқувваткунии ПТР-и 5 нг ДНК Ламбда бо 1,25 воҳиди Taq DNA Polymerase дар ҳузури 200 мкМ dNTP ва 0,2 мкМ праймерҳо ба ҳосили 5 кб дар назар дошта мешаванд.
3.Фаъолияти экзонуклеаза:Инкубатсияи реаксияи 50 мкл, ки дорои ҳадди аққал 12,5 U-и Так ДНК Полимераза бо олигонуклеотиди 10 нмол 5´-FAM дар тӯли 30 дақиқа дар 37 ℃ таназзули ошкоршаванда надорад.
4.Фаъолияти RNase:Инкубатсияи реаксияи 10 мкл, ки дорои 20 U фермент бо 1 мкг транскриптҳои РНК дар тӯли 2 соат дар 37°C боиси таназзули ошкоршавандаи РНК гардид, тавре ки тавассути электрофорези гел муайян карда шудааст.
5.Бефаъолияти гармӣ:Не.
Системаи реаксия
| Компонентхо | Ҳаҷм |
| Шаблон ДНКa | ихтиёрӣ |
| 10 μM Primer Forward | 0,5 мкл |
| 10 μM Primer баръакс | 0,5 мкл |
| Mix dNTP (ҳар кадомаш 10 мм) | 0,5 мкл |
| 5 × HC Taq буфери | 5 мкл |
| Так ДНК полимеразаб(5U/мкл) | 0,125 мкл |
| Оби бенуклеаз | То 25 мкл |
Эзоҳҳо:
1) а.
| ДНК | Маблағ |
| Геномӣ | 1 нг-1 мкг |
| Плазмид ё вирусӣ | 1 саҳ-1 нг |
2) б.Консентратсияи оптималии Taq DNA Polymerase метавонад дар барномаҳои махсус аз 5-50 адад/мл (0,1-0,5 воҳид/25 мкл реаксия) бошад.
Протоколи гардиши гармидиҳӣ
PCR
| Қадам | Ҳарорат(°C) | Вақт | Сиклҳо |
| Денатуратсияи ибтидоӣa | 95 ℃ | 1-3 дақиқа | - |
| Денатуратсия | 95 ℃ | 15-30 с | 30-35 Циклхо |
| Табобатб | 45-68 ℃ | 15-60 с | |
| Васеъ | 68 ℃ | 1кб/дақ | |
| Васеъкунии ниҳоӣ | 68 ℃ | 5 дақиқа | - |
Эзоҳҳо:
1) Денатуратсияи ибтидоии 1 дақиқа дар 95°С барои аксари пурқувваткунӣ кифоя аст.Барои қолибҳои душвор, денатуратсияи тӯлонии 2-3 дақиқа дар 95 ° C тавсия дода мешавад.Ҳангоми ПТР-и колония, денатуратсияи ибтидоӣ дар 5 дақиқа дар 95 ° C тавсия дода мешавад.
2) Қадами тозакунӣ одатан 15-60 с аст.Ҳарорати тозакунӣ ба Tm-и ҷуфти ибтидоӣ асос ёфтааст ва маъмулан 45-68 ℃ аст.
