Multiplex як қадами RT-qPCR Premix-UNG
Гурба №: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Kit (UDG Plus) маҷмӯаи мултиплексии миқдорӣ ПТР дар асоси РНК ҳамчун қолаб мебошад.Дар ҷараёни таҷриба дар як найча транскрипсияи баръакс ва ПТР-и миқдорӣ гузаронида шуд, ки ин амалиёти таҷрибавиро содда ва хатари ифлосшавиро кам кард.Дар ин маҷмӯа, аввалин cDNA ришта тавассути транскриптазаи баръакси ба гармӣ тобовар самаранок синтез карда шуд ва аз ҷониби HotStart Tag DNA Polymerase ба таври миқдорӣ васеъ карда шуд.Маҷмӯа асосан буфери оптимизатсияшудаи МП, омехтаи ферментҳо ва ғайраро дар бар мегирад. Маҳлули буферӣ аллакай Mg дорад.2+ва dNTP.Илова бар ин, омилҳое илова карда мешаванд, ки тақвияти ғайримуқаррарии ПТР-ро ба таври муассир боздоранд ва самаранокии пурқувваткунии реаксияҳои сершумори qPCR-ро беҳтар созанд, ки метавонанд самаранокии пурқувватро таъмин кунанд ва то реаксияи пурқуввати сершуморро иҷро кунанд.Системаи dUTP/UDG барои пешгирии самараноки хатари олудашавии аэрозолҳо илова карда шуд.
Компонентхо
1. Буфер
2. Омехтаи фермент
Мушаххасот
| Оғози гарм | Оғози гарми дарунсохт |
| Усули ошкор | Муайянкунии праймер-зонд |
| Усули PCR | Як қадами RT-qPCR |
| Полимераз | Так ДНК полимераза |
| Навъи намуна | ДНК |
Шароити нигоҳдорӣ
Маҳсулот бо яхи хушк фиристода мешавад ва мумкин аст дар -25 ~ -15 ℃ барои 1 сол нигоҳ дошта шавад.Он бояд зуд-зуд пешгирӣ карда шавадях кардан.Тавсия дода мешавад, ки алоҳида захира кунед.
Дастурҳо
1.Реаксия Система
| Компонентхо | Ҳаҷм (мкл) | Консентратсияи ниҳоӣ |
| 2 × буфери МП | 12.5 | 1× |
| Омехтаи фермент | 1 | - |
| Омехтаи Primer/Probe (2,5 μM) | 3 | 0,3мкм |
| Шаблон РНК | 1-10 | - |
| RNase Free H2O | ба 25 | - |
Эзоҳҳо:
Боварӣ ҳосил кунед, ки пеш аз истифода хуб омехта кунед, аз футури аз ҳад зиёд, ки аз ларзиши шадид ба вуҷуд омадаанд, пешгирӣ кунед.
а.Консентратсияи праймер: Омехтаи праймер аз ҷумла мултиплекс праймер, вобаста ба вазъият консентратсияи оптималии праймер шояд аз 0.l то 1.0μM.
б.Консентратсияи зонд: Омехтаи зонд, аз ҷумла фарқи гурӯҳи флуоресценти тамғагузории мултиплекси зонд, вобаста ба вазъият консентратсияи оптималии зонд шояд аз 0,05 то 0,5 мкм.
в.Равиши қолаб: qPCR хеле ҳассос аст ва тавсия дода мешавад, ки қолабро ҳал кунед.Арзиши назорати Ct аз 20 то 35 мувофиқ аст.
г.Омодасозии система: Лутфан дар мизи кории ултра тоза, пипетатор ва найчаи реаксия бидуни боқимондаи нуклеаза омода кунед;тавсия дода мешавад, ки сари таппонча бо элементи филтр истифода шавад.Аз ифлосшавии салиб ва ифлосшавии аэрозол худдорӣ намоед.
2. Велосипедронии оптимизатсияшудаПротокол
| Сикл қадам | Ҳарорат. | Вақт | Сиклҳо |
| Транскрипсияи баръакс | 50℃а | 20 дақиқа | 1 |
| Аввалин-денатуратсия | 95℃ | 5 дақиқа | 1 |
| Реаксияи амплификация | 95℃ | 15 сония |
40-45 |
| 60℃ b | 30 сония c |
Эзоҳҳо:
а.Транскрипсияи баръакс: Ҳарорат метавонад 42 ° C ё 50 ° C -ро интихоб кунад.
б.Реаксияи амплификация: Ҳарорат мувофиқи арзиши Tm-и праймерҳои тарҳрезишуда танзим карда мешавад.
в.Гирифтани сигнали флуоресцентӣ: Лутфан тартиби озмоиширо мувофиқи талаботи дастури асбоб муқаррар кунед.
Қайдҳо
Лутфан, барои таъмини саломатӣ ва бехатарии худ, либосҳои шахсии шахсии заруриро, аз қабили халтаҳои лабораторӣ ва дастпӯшакҳо пӯшед.
