2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Гурба №: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) барои анҷом додани PCR мустақиман аз намунаҳо бидуни истихроҷи ДНК ё омодасозии намуна тарҳрезӣ шудааст.Ин реагент аз полимеразаи гарми ДНК, урасил ДНК гликозилаза (UNG), ингибитори RNase, MgCl иборат аст.2, dNTPs (бо dUTP ба ҷои dTTP) ва стабилизаторҳо, барои PCR миқдорӣ (qPCR).Ин реагент таҳаммулпазирии баланди ингибиторҳоро пеш мебарад ва аз ин рӯ онро метавон мустақиман барои муайян кардани намунаҳо ба монанди тампончаи гулӯ, гилро, хуни пурраи зидди коагулятсияшуда, плазма ва хуноба бидуни истихроҷи ДНК истифода бурд.Реагент буфери хусусиро барои qPCR бо ферментҳои омехтаи полимеразаи зидди ингибитории ДНК ва ферменти UNG истифода мебарад.Аз ин рӯ, он метавонад амплификацияи хуби генҳои мақсаднокро дар намунаҳои дорои ингибиторҳо ба даст орад ва амплификацияи мусбати бардурӯғро, ки аз ифлосшавии боқимондаи PCR ва аэрозолҳо ба вуҷуд омадааст, боздорад.Ин реагент бо аксари асбобҳои флюоресцентии миқдории PCR, ба монанди Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche ва ғайра мувофиқ аст.
Компонентхо
1. 50 × Enzyme SensiDirect / омехтаи UNG
2. Буфери 2 × SensiDirect Premix (dUTP)
Шароити нигоҳдорӣ
Ҳама ҷузъҳо бояд дар -20 ℃ барои нигоҳдории дарозмуддат ва 4 ℃ то 3 моҳ нигоҳ дошта шаванд.Лутфан, пас аз обшавӣ бодиққат омехта кунед ва пеш аз истифода центрифуга кунед.Аз яхобшавии зуд-зуд худдорӣ кунед.
Протоколи велосипедронӣ
| Қадам | Ҳарорат | Вақт | Сикл |
| ҳозима | 50℃ | 2мин | 1 |
| Фаъолсозии полимераз | 95℃ | 1-5 дақиқа | 1 |
| Денатура | 95℃ | 10-20с | 40-50 |
| Табобат / васеъкунӣ | 56-64℃ | 20-60-ум |
Дастурҳои пипеткашӣ
| Реактив | Ҳаҷми як реаксия | Ҳаҷми як реаксия | Консентратсияи ниҳоӣ |
| 2 × буфери Premix SensiDirect (dUTP) | 12,5 мкл | 25 мкл | 1× |
| 50 × Enzyme SensiDirect / Mix UNG | 0,5 мкл | 1 мкл | 1× |
| 25 × Омехтаи Пример-Зонд1, 2 | 1 мкл | 2мл | 1× |
| Намуна3, 4 | - | - | - |
| ДД2O | - | - | - |
| Ҳаҷми умумӣ | 25 мкл | 50 мкл | - |
1. Консентратсияи ниҳоии праймер одатан 0,2μM аст.Барои натиҷаҳои беҳтар, консентратсияи праймерро дар доираи 0,2-1μM оптимизатсия кардан мумкин аст.
2. Умуман, консентратсияи санҷишро дар доираи 0.1-0.3μM оптимизатсия кардан мумкин аст.Консентратсияи оптималии зонд ба асбоби пурқувваткунии PCR дар вақти воқеӣ, навъи зонд ва навъи моддаи тамғагузории флуоресцентӣ алоқаманд аст.Лутфан ба дастури асбоб ё талаботи мушаххаси ҳар як зондҳои флуоресцентӣ муроҷиат кунед.
3. Намудҳои гуногуни намунаҳо дорои намудҳо ва мундариҷаи ингибитор ва шумораи нусхаи генҳои мақсаднок мебошанд.Ҳаҷми намуна бояд аз рӯи ҳолати воқеӣ баррасӣ карда шавад.Агар лозим бошад, бо илова кардани оби бенуклеаз ё TE буфери намунаро ҳал кунед.
4. Ҳаҷми тавсияшудаи намунаҳои гуногун:
| Намуна | Ҳаҷм барои як 50 мкЛ реаксия | Максимум таносуби |
| Хуни пурраи антикоагулянтшуда | 2,5 мкл | 5% |
| Плазма | 15 мкл | 30% |
| хуноба | 10 мкл | 20% |
| Тампончаи гулӯ | 10 мкл | 20% |
| гилро | 10 мкл | 20% |
Назорати сифат
1. Муайянкунии функсия: ҳассосият, хосият ва такроршавандагии qPCR.
2. Фаъолияти нуклеазаҳои экзогенӣ вуҷуд надорад: эндонуклеазаҳои экзогенӣ ва ифлосшавии экзонуклеазҳо.
Қайдҳои маҳсулот
1. Ин маҳсулот як навъи нави полимеразаи ДНК-и гармро истифода мебарад, ки онро дар 1-5 дақиқа фаъол кардан мумкин аст. Азбаски буфери реаксияи он оптимизатсия карда шудааст, он барои ПЗР-и миқдорӣ дукарата ё сершумори флуоресцентӣ бо истифода аз усули санҷиш мувофиқтар аст.
2. Агар арзиши Rn-и пурзӯркунии PCR хеле паст бошад ё амплификация баръало монеъ шуда бошад, кам кардани миқдори намуна, зиёд кардани ҳаҷми реаксия ё иловагии қаблии намуна метавонад натиҷаҳоро беҳтар кунад.
3. Ҷамъоварии хун, даҳон, пешоб, тампончаи гулӯ ва ғайра бояд ба талаботи меъёрҳои клиникӣ риоя карда шавад ва намунаи тару тоза метавонад барои пешгирии таназзули кислотаи нуклеинӣ истифода шавад.
4. Азбаски ампликонҳои гуногун самаранокии истифодабарӣ ба dUTP ва ҳассосият ба UNG гуногун доранд, реагентҳо бояд оптимизатсия карда шаванд, агар ҳассосияти ошкор ҳангоми истифодаи системаи UNG коҳиш ёбад.Лутфан, агар лозим бошад, барои дастгирии техникӣ бо мо тамос гиред.
5. Барои роҳ надодан ба пурзӯршавии маҳсулоти интиқоли ПТР байни реаксияҳои якқадам, майдони махсуси таҷрибавӣ ва пипетка барои пурқувваткунӣ лозим аст.Бо дастпӯшак амал кунед ва зуд-зуд иваз кунед ва найчаи реаксияро пас аз тақвияти PCR накушоед.
