DNase I (Rnase Free) (5u/ul)
Гурба №: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) як эндодеоксирибонуклеаза аст, ки метавонад ДНК-и яккатор ё дуқабатаро ҳазм кунад.Он пайвандҳои фосфодиэфирҳоро барои тавлиди монодеоксинуклеотидҳо ё олигодеоксинуклеотидҳои яккатор ё дуқатор бо гурӯҳҳои фосфатӣ дар 5'-терминал ва гидроксил дар 3'-терминал эътироф ва ҷудо мекунад.Фаъолияти DNase I аз Ca вобаста аст2+ва метавонад тавассути ионҳои металлии дувалентӣ ба монанди Mn фаъол карда шавад2+ва Zn2+.5 мм Ca2+ферментро аз гидролиз мухофизат мекунад.Дар ҳузури Mg2+, фермент метавонад ба таври тасодуфӣ ягон сайтро дар ҳама гуна риштаи ДНК шинохт ва ҷудо кунад.Дар хузури М2+, риштаҳои дугонаи ДНК-ро ҳамзамон дар як макон шинохтан ва ҷудо кардан мумкин аст, то пораҳои ДНК-и ҳамвор ё порчаҳои ДНК-и часпак бо 1-2 нуклеотид баромад кунанд.
Компонентхо
| Ном | 0,1КУ | 1КУ | 5 КУ | 50 КУ |
| DNase I, RNase озод | 20мкл | 200мкл | 1 мл | 10 мл |
| 10×DNase I буфер | 1 мл | 1 мл | 5 × 1 мл | 5 × 10 мл |
Шароити нигоҳдорӣ
-25 ℃ ~ -15 ℃ барои нигоҳдорӣ;Интиқол дар зери бастаҳои ях.
Дастурҳо
1. Маҳлули реаксияро дар найчаи бе RNase мувофиқи таносуби дар поён овардашуда омода кунед:
| Компонент | Ҳаҷм |
| РНК | X мкг |
| 10 × DNase I буфер | 1 мкл |
| DNase I, RNase озод (5U/μL) | 1 U барои як мкг РНК① |
| ДД2O | То 10 мкл |
Эзоҳ: ①Ҳаҷми DNase I, ки бояд дар асоси миқдори РНК илова карда шавад, ҳисоб кунед.
2. 37 ℃ барои 15 дақиқа;
3. Ба консентратсияи ниҳоии 2,5мм~5мМ 0,5М EDTA илова кунед ва дар ҳарорати 65℃ барои 10 дақиқа гарм кунед, то реаксияро қатъ кунед.Намунаро метавон мустақиман барои реаксияи навбатӣ ба монанди транскрипсияи баръакс истифода бурдозмоиш.
Таърифи воҳид
Як воҳид ҳамчун миқдори фермент муайян карда мешавад, ки 1μg pBR322-ро комилан таназзул мекунадДНК дар 10 дақиқа дар 37 ℃.
Назорати сифат
RNase:5U аз DNase I бо 1,6 мкг MS2 RNA барои 4 соат дар 37 ℃ ҳеҷ таназзул намедиҳад, зеробо электрофорези гели агароз муайян карда мешавад.
Қайдҳо
1. Лутфан худатон 0,5 MEDTA тайёр кунед.
2. 1U DNase I барои як мкг РНК истифода баред.Аммо, агар РНК аз 1 мкг камтар бошад, лутфан 1U DNase I-ро истифода баред.
3. Лутфан, ферментро ҳангоми кор дар рӯи ях ҷойгир кунед.
