Superstart qPCR Premix plus-UNG
Гурба №: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG як реагенти махсусгардонидашудаест, ки барои реаксияҳои сифатӣ ва миқдорӣ дар вақти воқеӣ бо истифода аз ташхиси зондӣ тарҳрезӣ шудааст, ки махсус барои равандҳои лиофилизатсия таҳия шудааст.Он дорои як ферменти нави Hotstart Taq plus (DG) мебошад, ки фаъолияти ферменти Taq-и худро дар ҳарорати хонагӣ мӯҳр мекунад ва амплификацияи ғайримуқаррариро, ки дар натиҷаи коркарди ғайримуқаррарӣ ё ташаккули димери праймер дар шароити ҳарорати паст ба вуҷуд омадааст, ба таври муассир пешгирӣ мекунад. хосияти реаксияи амплификация.Ин реагент буфери оптимизатсияшудаи махсуси qPCR ва системаи зидди ифлосшавии UNG/dUTP-ро барои ноил шудан ба оғози зуди гарм истифода мебарад, ки самаранокӣ ва ҳассосияти реаксияҳои qPCR-ро хеле беҳтар мекунад.Он метавонад каҷҳои хуби стандартиро дар доираи васеи минтақаҳои миқдорӣ ба даст орад ва миқдорро дақиқ иҷро кунад, аз тақвияти мусбати бардурӯғ, ки аз маҳсулоти боқимондаи PCR ё ифлосшавии аэрозол ба вуҷуд омадааст, пешгирӣ кунад.Ин реагент бо аксари асбобҳои флюоресцентии миқдории PCR аз истеҳсолкунандагон ба монанди Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad ва Roche ва ғайра мувофиқ аст ва дар шакли лиофилизатсия устувории хуб нишон медиҳад.
Таркиби реактив
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+озод) (DG)
2. 250 мм MgCl2
3. 4×лиопротектор (ихтиёрӣ)
Шароити нигоҳдорӣ
Нигоҳдории дарозмуддат дар -20 ℃;дар ҳарорати 4℃ то 3 моҳ нигоҳ доштан мумкин аст.Пеш аз истифода хуб омехта кунед вааз яхкунӣ ва обшавии такрорӣ пешгирӣ кунед.
Протоколи велосипедронӣ
| Тартиб | Ҳарорат. | Вақт | Сикл |
| ҳозима | 50℃ | 2 дақ | 1 |
| Фаъолсозии полимераз | 95℃ | 1 ~ 5 дақиқа | 1 |
| Денатура | 95℃ | 10—20 с | 40-50 |
| Таъмин ва тамдид | 56 ~ 64 ℃ | 20—60 с | 40-50 |
qPCR реаксияи моеъ SyТайёр кардани поя
|
Таркиб |
Ҳаҷми 25μL |
Ҳаҷми 50μL |
Консентратсияи ниҳоӣ |
| 5 × HotstartPremix плюс-UNG(Mg2+озод) (DG) | 5 мкл | 10 мкл | 1× |
| 250мМ MgCl2 | 0,45 мкл | 0,9 мкл | 4,5 мм |
| 4 × лиопротектор1 | 6,25 мкл | 12,5 мкл | 1× |
| 25 × Омехтаи Пример-Зонд2 | 1 мкл | 2мл | 1× |
| Шаблон ДНК3 | —— | —— | —— |
| ДД2O | Ба 25 мкл | Ба 50 мкл | —— |
1. Консентратсияи ниҳоии 0.2μM барои праймерҳо одатан натиҷаҳои хуб медиҳад;вақте ки иҷрои реаксия паст аст, консентратсияи праймерро дар доираи 0,2-1μM мувофиқи зарурат танзим кунед.Консентратсияи зонд одатан дар доираи 0.1-0.3μM тавассути таҷрибаҳои градиентӣ барои ёфтани комбинатсияи оптималӣ оптимизатсия карда мешавад.
2. Шумораи нусхаҳои генҳои мақсаднок, ки дар намудҳои гуногуни қолабҳо мавҷуданд, фарқ мекунад;дар ҳолати зарурӣ, барои муайян кардани миқдори оптималии иловаи қолаби градиентро метавон ҳал кард.
3. Ин системаро лиофилизатсия кардан мумкин аст;вақте ки муштариён ин системаро бидуни талаботи яхкунӣ-хушккунӣ истифода мебаранд, 4 × лиопротекторро интихобан илова кардан мумкин аст; агар маҳсулоти яхкардашуда лозим бошад, дар марҳилаи санҷиши реагентҳои моеъ, он бояд 4 × лиопротектор илова кунад, то мувофиқат бо ҷузъҳои системаи лиофилизатсияшуда таъмин карда шавад. ва эффектхо.
Вақте ки система истифода мешавадг барои яхдон хушк кардан, тайёр кардан система as зерин:
| Таркиб | 25мкЛ Системаи реаксия |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+озод) (DG) | 5 мкл |
| 250мМ MgCl2 | 0,45 мкл |
| 4 × лиопротектор | 6,25 мкл |
| 25 × Омехтаи Пример-Зонд | 1 мкл |
| ДД2O | Ба 18 ~ 20μL |
* Агар системаҳои дигар барои яхкунӣ-хушккунӣ лозим бошад, лутфан алоҳида машварат кунед.
Раванди лиофилизатсияss
| Тартиб | Ҳарорат. | Вақт | Вазъият | Фишор |
| Пеш аз яхкунӣ | 4℃ | 30 дақиқа | Нигоҳ доред |
1 атм |
| -50℃ | 60 дақиқа | Хунуккунӣ | ||
| -50℃ | 180 дақиқа | Нигоҳ доред | ||
| Хушккунии ибтидоӣ | -30℃ | 60 дақиқа | Гармкунӣ |
Вакууми ниҳоӣ |
| -30℃ | 70 дақиқа | Нигоҳ доред | ||
| Хушккунии дуюмдараҷа | 25℃ | 60 дақиқа | Гармкунӣ |
Вакууми ниҳоӣ |
| 25℃ | 300 дақиқа | Нигоҳ доред |
2. Раванди лиофилизатсияи дар боло зикршуда танҳо барои истинод аст.Намудҳои гуногуни маҳсулот ва хушккунакҳои гуногуни яхкунӣ параметрҳои гуногун доранд, аз ин рӯ метавон мувофиқи ҳолати воқеӣ ислоҳот ворид кард.шароит ҳангоми истифода.
3. Равандҳои гуногуни лиофилизатсия метавонанд барои андозаи партияи лиофилизатсия мувофиқ бошандМаҳсулоте, ки барои истеҳсоли миқёси калон истифода мешавад, бояд санҷиши кофии санҷиш гузаронида шавад.
Дастурамал оид ба истифодаи лиофилизаг хока
1. Хокаи лиофилизатсияшударо мухтасар центрифуга кунед;
2. Шаблони кислотаи нуклеинро ба хокаи лиофилизатсияшуда илова кунед ва обро то 25 мкл илова кунед;
3. Бо центрифугакунӣ хуб омехта кунед ва дар мошин кор кунед.
Назорати сифат:
1. Санҷиши функсионалӣ: ҳассосият, хосият, такроршавандагии qPCR.
2. Фаъолияти экзогении нуклеаза, ифлосшавии экзогении эндо/экзонуклеаза вуҷуд надорад.
Маълумоти техникӣ:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG як ферменти нави гармро истифода мебарад, ки имкон медиҳад, ки дар давоми 1 ~ 5 дақиқа гарм оғоз шавад;тавассути формулаи махсуси буферӣ он барои реаксияҳои мултиплексии флюоресцентии PCR мувофиқ аст.
2. Он дорои хосиятҳои баландтар аст, ки ҳассосияти муайянкунии лимити миқдории PCR-и флуоресцентиро ба таври назаррас беҳтар мекунад, каҷҳои пурқувватро ба эътидол меорад, арзиши флуоресцент дар қолабҳои консентратсияи паст, ки ба сифати реагентҳои муайянкунии миқдории флюоресценти PCR ҳассосияти баланд мувофиқ аст, беҳтар мегардад.
3. Барои праймерҳо бо ҳарорати пасттар ё бештар аз порчаҳои 200bp, усули 3-қадам тавсия дода мешавад.
4. Самаранокии истифодаи dUTP ва ҳассосият ба ферментҳои UNG барои генҳои гуногуни мақсаднок фарқ мекунанд, бинобар ин, агар истифодаи системаи UNG боиси паст шудани ҳассосияти ошкор гардад, системаи реаксия бояд танзим ва оптимизатсия карда шавад.Агар дастгирии техникӣ лозим бошад, лутфан бо ширкати мо тамос гиред.
5. Пеш аз амплификатсия ва пас аз амплификатсия майдонҳо ва пипеткаҳои махсусро истифода баред, ҳангоми кор дастпӯшак пӯшед ва онҳоро зуд-зуд иваз кунед;Пас аз анҷоми PCR найчаи реаксияро накушоед, то ифлосшавии намунаҳоро бо маҳсулоти ПЗР ба ҳадди ақалл кам кунед.
