Ферментҳои UDG/UNG
UDG (урасил ДНК гликозилаза) метавонад гидролизи пайванди N-гликозидиро байни пойгоҳи урацил ва сутуни фосфати қанд дар ssDNA ва dsDNA катализ кунад.Он метавонад ба осонӣ ифлосшавии аэрозолҳоро назорат кунад ва барои системаҳои умумии биологияи молекулавӣ ба монанди PCR, qPCR, RT-qPCR ва LAMP мувофиқ аст.
Мушаххасоти
| Мизбони баён | Recombinant E. coli бо гени урасил ДНК гликозилаза |
| Вазни молекулавӣ | 24. 8кДа |
| Покӣ | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Инактиватсияи гармӣ | 95℃, 5~10 дақ |
| Таърифи воҳид | Як воҳид (U) ҳамчун миқдори ферменте муайян карда мешавад, ки барои катализ кардани гидролизи dsDNA-и lμg dU-дор дар 30 дақиқа дар ҳарорати 25℃ зарур аст. |
Нигоҳдорӣ
Маҳсулот бояд дар -25 ° C ~ -15 ° C барои ду сол нигоҳ дошта шавад.
Дастурҳо
1.Омода кардани омехтаи реаксияи PCR мувофиқи системаи зерин
| Компонентхо | Ҳаҷм (мкл) | Консентратсияи ниҳоӣ |
| 10 × буфери PCR (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 ммоль/LMgCl | 3 | 1,5 ммоль/л |
| dUTP (10 ммоль/л) | 3 | 0,6 ммоль/л |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10ммоль/Лич) | 1 | 0,2 ммоль/шустушӯ |
| Шаблон ДНК | X | - |
| Primer1 (10мкмоль/л) | 2 | 0,4 мкмоль/л |
| Пример 2 (10мкмоль/л) | 2 | 0,4 мкмоль/л |
| Так ДНК Полимераза (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 У/мкл |
| Урацил ДНК гликозилаза (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 У/мкл |
| ddH₂O | То 50 | - |
Шарҳ: Мувофиқи талаботи таҷрибавӣ, консентратсияи ниҳоии dUTP метавонад байни 0,2-0,6 ммоль / л танзим карда шавад ва 0,2 ммоль / л dTTP ба таври интихобӣ илова карда шавад.
2.Раванди амплификация
| Қадами даврӣ | Ҳарорат | Вақт | Сиклҳо |
| таназзули қолаби дорои dU | 25℃ | 10 дақиқа | 1 |
| Фаъолсозии UDG, денатуратсияи ибтидоии шаблон | 95℃ | 5 ~ 10 дақиқа | 1 |
| Денатуратсия | 95℃ | 10 сония |
30-35 |
| Табобат | 60℃ | 20 сония | |
| Васеъ | 72℃ | 30сек/кб | |
| Тамдиди ниҳоӣ | 72℃ | 5 дақиқа | 1 |
Шарҳ: Вақти реаксия дар ҳарорати 25 ° C метавонад дар давоми 5-10 дақиқа мувофиқи талаботи таҷрибавӣ танзим карда шавад.
Қайдҳо
1.UDG дар аксари буферҳои реаксияи PCR фаъол аст.
2.Ҳангоми истифода ферментҳо бояд дар яхдон ё дар ваннаи ях нигоҳ дошта шаванд ва фавран пас аз истифода дар ҳарорати -20 ° C нигоҳ дошта шаванд.
3.Лутфан, барои таъмини саломатӣ ва бехатарии худ, либосҳои шахсии шахсӣ, аз қабили лабораторӣ ва дастпӯшакҳои заруриро пӯшед!
