Ингибитори Rnase (глицерол ройгон)
Ингибитори мурин RNase як ингибитори рекомбинантии RNase мурин аст, ки аз E.coli ифода ва тоза карда шудааст.Он ба RNase A, B ё C дар таносуби 1: 1 тавассути пайванди ғайриковалентӣ мепайвандад ва ба ин васила фаъолияти се ферментро бозмедорад ва РНК-ро аз таназзул муҳофизат мекунад.Аммо, он бар зидди RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H ё RNase аз Aspergillus самаранок нест.Ингибитори мурин RNase аз ҷониби RT-PCR, RT-qPCR ва IVT mRNA озмуда шуд ва бо транскриптазаҳои гуногуни тиҷоратӣ, полимеразҳои ДНК ва полимеразаҳои РНК мувофиқ буд.
Дар муқоиса бо ингибиторҳои RNase инсон, ингибитори мурин RNase ду систеинро дар бар намегирад, ки ба оксидшавӣ хеле ҳассосанд, ки боиси ғайрифаъолшавии ингибитор мегардад.Ин онро дар консентратсияи пасти DTT (камтар аз 1 мм) устувор мегардонад.Ин хусусият онро барои истифода дар реаксияҳое мувофиқ месозад, ки консентратсияи баланди DTT ба реаксия номувофиқ аст (масалан, дар вақти воқеӣ RT-PCR).
Aариза
Ин маҳсулотро дар ҳама гуна таҷрибаҳо васеъ истифода бурдан мумкин аст, ки дар он дахолати RNase барои пешгирӣ кардани таназзули РНК имконпазир аст, ба монанди:
1.Синтези cDNA-и якум, RT-PCR, RT-qPCR ва ғайра;
2. Муҳофизати РНК аз таназзул дар транскрипсия/тарҷумаи in-vitro (масалан, такрори вирусӣ дар vitro);
3.Монеаи фаъолияти RNase ҳангоми ҷудокунӣ ва тозакунии РНК.
Шароити нигоҳдорӣ
Дар -25～-15℃ нигоҳ доред;
Давраи яхкунӣ ва обшавӣ ≤ 5 маротиба;
1 сол эътибор дорад.
Таърифи воҳид
Як воҳид ҳамчун миқдори ингибитори RNase муайян карда мешавад, ки барои боздоштани фаъолияти 5 нг RNase A то 50% зарур аст.
Вазни молекулавӣ
Ингибитори RNase (бе глицерол) як сафедаи 50 кДа аст.
Назорати сифат
Экзонуклеаза Фаъолият:
Инкубатсияи 40 U фермент бо 1 мкг λ-Hind III ҳазми ДНК дар тӯли 16 соат дар 37°С боиси таназзули ошкоршавандаи ДНК, тавре ки бо электрофорези гел муайян карда шудааст, ба вуҷуд наомад.
Фаъолияти эндонуклеаза:
Инкубатсияи 40 U фермент бо 1 мкг λ ДНК дар давоми 16 соат дар 37°С боиси таназзули ошкоршавандаи ДНК гардид, ки бо электрофорези гел муайян карда шудааст.
Ник кардан Фаъолият:
Инкубатсияи 40 U фермент бо 1 мкг pBR322 дар тӯли 16 соат дар 37 ° C боиси таназзули ошкоршавандаи ДНК гардид, ки бо электрофорези гел муайян карда шудааст.
RNase Фаъолият:
Инкубатсияи 40 U фермент бо 1,6 мкг MS2 РНК дар давоми 4 соат дар 37℃ боиси таназзули ошкоршавандаи РНК, ки бо электрофорези гел муайян карда шудааст, оварда нашудааст.
E.ДНК coli:
40 U аз фермент тавассути TaqMan qPCR муайян карда мешавад.ДНК E.coli ≤ 0. 1pg/40U аст.
Nотеs
1. Барои пешгирии бефаъолшавии ферментҳо сахт наларзонед ё ба шӯр назанед.
2.Ингибитори RNase дар ҳарорати аз 25 ℃ то 55 ℃ фаъол аст ва дар ≥65 ℃ ғайрифаъол мешавад.
3.Фаъолияти RNase H, RNase 1 ва RNase T1 монеъ намешавад.
4.Дипазони рН барои боздоштани фаъолияти RNase васеъ аст (фаъол дар pH 5-9), ҳадди аксар дар pH 7-8 фаъолият мекунад.
