Маҷмӯаи истихроҷи вируси ДНК/РНК
Ин маҷмӯа барои истихроҷи босуръати ДНК/РНК-и вирусии тозагӣ аз намунаҳо ба монанди тампонҳои бинӣ, тампонҳои экологӣ, супернатантҳои фарҳанги ҳуҷайра ва супернатантҳои гомогенати бофта мувофиқ аст.Маҷмӯа ба технологияи тозакунии мембранаи кремний асос ёфтааст, ки зарурати истифодаи маҳлулҳои органикии фенол/хлороформ ё боришоти спиртии вақти зиёдро барои истихроҷи ДНК/РНК-и вирусӣ аз байн мебарад.Кислотаҳои нуклеини ба даст овардашуда аз ифлосиҳо озоданд ва барои истифода дар таҷрибаҳои поёноб ба монанди транскрипсияи баръакс, PCR, RT-PCR, PCR дар вақти воқеӣ, пайдарпайии насли оянда (NGS) ва blot Northern омодаанд.
Шароити нигоҳдорӣ
Дар ҳарорати 15 ~ 25 ℃ нигоҳ доред ва дар ҳарорати хона интиқол диҳед
Компонентхо
| Компонентхо | 100RXNS |
| Буфер VL | 50 мл |
| Буфери RW | 120 мл |
| RNase озод ddH2 O | 6 мл |
| Сутунҳои FastPure RNA | 100 |
| Қубурҳои коллексия (2 мл) | 100 |
| Тубҳои коллексияи бе RNase (1 ,5 мл) | 100 |
Буфери VL:Муҳити лизис ва пайвастшавӣ фароҳам оред.
Буфери RW:Протеинҳои боқимонда ва дигар ифлосҳоро хориҷ кунед.
RNase озод ddH2O:ДНК/РНК-ро аз мембрана дар сутуни spin elute кунед.
Сутунҳои FastPure RNA:Махсусан адсорбсияи ДНК/РНК.
Қубурҳои коллексия 2 мл:Филтрро ҷамъ кунед.
Тубҳои коллексияи бе RNase 1,5 мл:Ҷамъоварии ДНК/РНК.
Барномаҳо
Тампонҳои назофарингеалӣ, тампонҳои экологӣ, супернатантҳои фарҳанги ҳуҷайра ва супернатантҳои гомогенати бофта.
Mater худаш тайёрials
Маслиҳатҳои пипеткаҳои бе RNase, 1,5 мл найҳои центрифугаи RNase озод, центрифуга, миксерҳои гирдоби ва пипеткаҳо.
Раванди таҷриба
Ҳама қадамҳои зеринро дар кабинети биологӣ иҷро кунед.
1. 200 мкл намунаро ба найчаи сентрифугаи бе RNase илова кунед (дар сурати набудани намуна бо PBS ё 0,9% NaCl тайёр кунед), 500 мкл Buffer VL илова кунед, бо гирдоби 15 – 30 сония хуб омехта кунед ва центрифуга кунед. мухтасар чамъ кардани махлул дар поёни найча.
2. Сутунҳои FastPure RNA дар қубурҳои коллексияи 2 мл ҷойгир кунед.Омехтаро аз Қадами 1 ба сутунҳои FastPure RNA интиқол диҳед, дар 12,000 чархзанӣ (13,400 × г) барои 1 дақиқа центрифуга кунед ва филтрро партоед.
3. Ба сутунҳои FastPure RNA 600 мкл Buffer RW илова кунед, дар 12,000 rpm (13,400 × г) барои 30 сония центрифуга кунед ва фильтратро партоед.
4. Қадами 3-ро такрор кунед.
5. Сутуни холиро дар 12,000 чархзанӣ (13,400 × г) барои 2 дақиқа центрифуга кунед.
6. Сутунҳои FastPure RNA-ро ба қубурҳои нави коллексияи RNase 1,5 мл (дар маҷмӯа дода шудааст) бодиққат интиқол диҳед ва 30 – 50 мкл ddH2O-и RNase-ро ба маркази мембрана бидуни ламс ба сутун илова кунед.Иҷозат диҳед, ки дар ҳарорати хонагӣ барои 1 дақиқа истода, дар 12,000 чархзанӣ (13,400 × г) барои 1 дақиқа центрифуга кунед.
7. Сутунҳои FastPure RNA-ро партоед.ДНК/РНК-ро мустақиман барои таҳлилҳои минбаъда истифода бурдан мумкин аст ё дар -30 ~ -15 ° C барои як муддати кӯтоҳ ё -85 ~ -65 ° C барои муддати тӯлонӣ нигоҳ дошта мешавад.
Қайдҳо
Танҳо барои истифодаи тадқиқотӣ.На барои истифода дар расмиёти ташхис.
1. Пешакӣ намунаҳоро ба ҳарорати хонагӣ баробар кунед.
2. Вирусҳо хеле сироятӣ мебошанд.Лутфан боварӣ ҳосил кунед, ки пеш аз озмоиш тамоми чораҳои бехатарии зарурӣ андешида шудаанд.
3. Аз яхкунӣ ва обшавии такрории намуна худдорӣ намоед, зеро ин метавонад боиси таназзул ё кам шудани ҳосили ДНК/РНК-и вирусии истихроҷшуда гардад.
4. Таҷҳизоти худтайёршуда аз нӯги пипеткаҳои бе RNase, найҳои сентрифугаи 1,5 мл RNase, центрифуга, миксери гирдоби ва пипеткаҳо иборат аст.
5. Ҳангоми истифодаи маҷмӯа, куртаи лабораторӣ, дастпӯшакҳои якдафъаинаи латексӣ ва ниқоби якдафъаина пӯшед ва барои кам кардани хатари олудашавии RNase маводи истеъмолии RNase-ро истифода баред.
6. Ҳама амалҳоро дар ҳарорати хонагӣ иҷро кунед, агар тартиби дигаре пешбинӣ нашуда бошад.
Механизм ва ҷараёни кор
