Маҷмӯаи генотипсозии муш

Гурба №: HCR2021A

Ин маҳсулот маҷмӯаест, ки барои муайянкунии босуръати генотипҳои муш, аз ҷумла истихроҷи хоми ДНК ва системаи тақвияти ПТР пешбинӣ шудааст.Маҳсулотро метавон барои тақвияти PCR мустақиман аз думи муш, гӯш, ангушти пой ва бофтаҳои дигар пас аз тақсимоти оддӣ аз ҷониби Lysis Buffer ва Proteinase k истифода бурд.Дар як шабонарӯз ҳозима, истихроҷи фенол-хлороформ ё тозакунии сутун, ки оддӣ аст ва вақти сарфи таҷрибаҳоро кӯтоҳ мекунад.Маҳсулот барои тақвияти порчаҳои мавриди ҳадаф то 2 кб ва реаксияҳои мултиплексии PCR бо то 3 ҷуфт праймер мувофиқ аст.Mix PCR Direct 2× Tissue Mouse дорои полимеразаи аз ҷиҳати генетикӣ сохташудаи ДНК, Mg мебошад.²⁺, dNTPs ва системаи оптимизатсияшудаи буферӣ барои таъмин кардани самаранокии баланди амплификация ва таҳаммулпазирии ингибиторҳо, то реаксияҳои PCR тавассути илова кардани қолаб ва праймерҳо ва регидратсияи маҳсулот ба 1 × амалӣ карда шаванд.Маҳсулоти PCR, ки бо ин маҳсулот тақвият дода шудааст, дар охири 3′ пойгоҳи намоёни "А" дорад ва онро мустақиман барои клонкунии TA пас аз тозакунӣ истифода бурдан мумкин аст.

Компонентхо

Шароити нигоҳдорӣ

Маҳсулот бояд дар ҳарорати -25 ~ -15 ℃ барои 2 сол нигоҳ дошта шаванд.Пас аз обшавӣ, Lysis Buffer-ро дар ҳарорати 2 ~ 8 ℃ барои истифодаи кӯтоҳмуддати чандкарата нигоҳ доштан мумкин аст ва ҳангоми истифода хуб омехта кунед.

Ариза

Ин маҳсулот барои таҳлили нокаутҳои муш, ташхиси трансгенӣ, генотипсозӣ ва ғайра мувофиқ аст.

Вижагиҳо

1.Амалиёти оддӣ: зарурати истихроҷи ДНК-и геномӣ нест;

2.Истифодаи васеъ: барои тақвияти мустақими бофтаҳои гуногуни муш мувофиқ аст.

Дастурҳо

1.Баровардани ДНК-и геномӣ

1) Тайёр кардани лизат

Лизати матоъ мувофиқи шумораи намунаҳои муш, ки лизи карда мешавад, омода карда мешавад (лизати бофта бояд дар маҳал мувофиқи миқдор омода карда шавад ва барои истифода бодиққат омехта карда шавад) ва таносуби реактивҳои барои як намуна зарурӣ чунин аст:

2) Тайёр кардани намуна ва лизис

Истифодаи бофтаи тавсияшаванда

Миқдори мувофиқи намунаҳои бофтаи мушро дар қубурҳои центрифугаи тоза гиред, ба ҳар як найчаи центрифуга 200 мкл лизати тозаи бофта илова кунед, гирдоб кунед ва ҷунбонед, сипас дар 55 ℃ барои 30 дақиқа инкубатсия кунед ва сипас дар 98 ℃ барои 3 дақиқа гарм кунед.

3) центрифугакунӣ

Лизатро хуб такон диҳед ва дар 12000 чархзанӣ барои 5 дақиқа центрифуга кунед.Супернатантро метавон ҳамчун қолаб барои тақвияти PCR истифода бурд.Агар қолаб барои нигоҳдорӣ лозим бошад, супернатантро ба дигар найчаи центрифугаи безарар интиқол диҳед ва дар ҳарорати -20℃ барои 2 ҳафта нигоҳ доред.

2.Амплификацияи PCR

Омехтаи 2×Tissue PCR Direct-ро аз -20℃ хориҷ кунед ва дар ях об кунед, зеру забар омехта кунед ва системаи реаксияи PCR-ро мувофиқи ҷадвали зерин омода кунед (дар рӯи ях кор кунед):

Шарҳ:

a) Маблағи иловашуда набояд аз 1/10 система зиёд бошад ва агар аз ҳад зиёд илова карда шавад, тақвияти PCR метавонад боздорад.

Шароитҳои тавсияшудаи PCR

Шарҳ:

a) Ҳарорати тозакунӣ: Бо истинод ба арзиши Tm-и праймер, тавсия дода мешавад, ки ҳарорати гармкунӣ ба арзиши камтари Tm -и праймер +3~5℃ муқаррар карда шавад.

Мушкилот ва роҳҳои ҳалли умумӣ

1.Не тасмаҳои мақсаднок

1) Маҳсулоти аз ҳад зиёди лизис.Миқдори мувофиқтарин қолабро интихоб кунед, одатан на бештар аз 1/10 система;

2) Андозаи намунаи хеле калон.Лизатро 10 маротиба маҳлул кунед ва сипас васеъ кунед ё андозаи намунаро кам кунед ва дубора лизис кунед;

3) Намунаҳои бофтаҳо тару тоза нестанд.Тавсия дода мешавад, ки намунаҳои бофтаҳои тару тоза истифода шаванд;

4) Сифати пасти ибтидоӣ.ДНК-и геномиро барои амплификация истифода баред, то сифати праймерро тафтиш кунед ва тарҳи праймерро оптимизатсия кунед.

2.Амплификацияи ғайримуқаррарӣ

1) Ҳарорати табобат хеле паст аст ва рақами давра хеле баланд аст.Ҳарорати гармкуниро зиёд кунед ва шумораи давраҳоро кам кунед;

2) Консентратсияи шаблон хеле баланд аст.Миқдори қолабро кам кунед ё қолабро 10 маротиба пас аз пурзӯркунӣ об кунед;

3) Хусусияти пасти ибтидоӣ.Тарҳрезии праймерро оптимизатсия кунед.

Қайдҳо

1.Барои роҳ надодан ба ифлосшавии дутарафа байни намунаҳо, асбобҳои сершумори намунагирӣ бояд омода карда шаванд ва сатҳи асбобҳоро бо маҳлули 2% гипохлориди натрий ё тозакунандаи кислотаи нуклеинӣ пас аз ҳар як намуна тоза кардан мумкин аст, агар истифодаи такрорӣ зарур бошад.

2.Тавсия дода мешавад, ки бофтаҳои тозаи мушро истифода баред ва ҳаҷми интихоб набояд аз ҳад зиёд калон бошад, то ба натиҷаҳои амплификация таъсир нарасонад.

3.Lysis Buffer бояд аз обшавии зуд-зуд худдорӣ кунад ва онро дар ҳарорати 2~8℃ барои истифодаи кӯтоҳмуддати чандкарата нигоҳ доштан мумкин аст.Агар дар ҳарорати паст нигоҳ дошта шавад, боришот метавонад ба амал ояд ва пеш аз истифода бояд пурра ҳал карда шавад.

4.Mix PCR бояд аз яхшавии зуд-зуд худдорӣ кунад ва онро дар ҳарорати 4℃ барои истифодаи кӯтоҳмуддати такрорӣ нигоҳ доштан мумкин аст.

5.Ин маҳсулот танҳо барои таҳқиқоти таҷрибавии илмӣ аст ва набояд дар ташхиси клиникӣ ё табобат истифода шавад.