Як қадами RT-qPCR SYBR Green Premix
Гурба №: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix барои муайян кардани миқдори флуоресцент дар асоси ранги SYBR Green I мебошад.Бо истифода аз праймерҳои мушаххаси ген, транскрипсияи баръакс ва реаксияҳои qPCR дар як найча анҷом дода мешаванд, ки эҳтиёҷоти амалиёти такрории сарпӯш ва пиптингро аз байн бурда, самаранокии таҳлилро хеле беҳтар мекунад ва хатари ифлосшавиро коҳиш медиҳад.Барои намунаҳои RNA, маҷмӯа транскриптазаи баръакси ба гармӣ тобоварро барои синтези самараноки cDNA ва HotStart Taq DNA Polymerase барои тақвияти миқдорӣ истифода мебарад.Дар доираи системаи оптимизатсияшудаи буферӣ, ҳассосияти маҷмӯа метавонад то 0,1 pg барои ҳадафҳои баланд ифодашуда ва то 1 pg барои ҳадафҳои мӯътадил ифодашуда бошад.Маҷмӯа барои тақвият ва миқдори намунаҳои ДНК мувофиқ аст.Он имкон медиҳад, ки ҳассос муайян ва миқдори кислотаҳои нуклеинро аз намунаҳои гуногуни растанӣ ва ҳайвонот, ҳуҷайраҳо ва микроорганизмҳо муайян кунанд.
Компонентхо
| No | Ном | Ҳаҷм | Ҳаҷм |
| 1 | Буфери пешрафта | 250 мкл | 2×1,25 мл |
| 2 | Омехтаи пешрафтаи фермент | 20 мкл | 200 мкл |
| 3 | RNase Free H2O | 250 мкл | 2×1,25 мл |
Шароити нигоҳдорӣ
Ин маҳсулот бояд дар -25 ~ -15 ℃ дур аз рӯшноӣ барои 1 сол нигоҳ дошта шавад.
Дастурҳо
1.Танзимоти системаи реаксияd
| Компонентхо | Ҳаҷм (мкл) | Ҳаҷм (мкл) | Консентратсияи ниҳоӣ |
| Буфери пешрафта | 12.5 | 25 | 1× |
| Омехтаи пешрафтаи фермент | 1 | 2 | - |
| Примери пеш (10 мкмоль/л)a | 0,5 | 1 | 0,2 мкмоль/л |
| Примери баръакс (10 мкмоль/л)a | 0,5 | 1 | 0,2 мкмоль/л |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNase Free H2Оc | ба 25 | ба 50 | - |
Эзоҳҳо:
1) а.Тконсентратсияи ниҳоии праймер 0,2 мкмоль/л буд, ки онро низ метавон аз 0,1 то 1 мкмоль/л танзим кард.
2) б.Реагент ниҳоят ҳассос аст, бо Total RNA дар доираи 1pg-1μg ва санҷиши намунаҳои инсонӣ саҳми оптималии 1 pg-100 нгро нишон дод, ки арзиши умумии Ct-ро дар доираи 15-30 мувофиқ назорат мекард.
3) в.Тавсия дода мешавад, ки 20 мкл ё 50 мкл истифода шавад, то эътиборнокӣ ва такроршавандагии амплификацияи генҳои мақсаднокро таъмин кунад.
4) г.Лутфан, дар курсии ултра тоза омода кунед ва маслиҳатҳо ва найҳои реаксияро аз пасмондаҳои нуклеаз истифода баред;маслиҳатҳо бо картриджҳои филтр тавсия дода мешаванд.Аз ифлосшавии салиб ва ифлосшавии аэрозол худдорӣ намоед.
2.Барномаи реаксия
| Қадами даврӣ | Ҳарорат. | Вақт | Сиклҳо |
| Транскрипсияи баръакс | 50℃a | 6 дақиқа | 1 |
| Денатуратсияи ибтидоӣ | 95℃ | 5 дақиқа | 1 |
| Реаксияи амплификация | 95℃ | 15 сония | 40 |
| 60℃b | 30 сония | ||
| Марҳилаи каҷи обшавӣ | Пешфарзҳои асбоб | 1 | |
Эзоҳҳо:
1) а.Ҳарорати транскрипсияи баръаксро мувофиқи ниёзҳои таҷрибавӣ дар байни 50-55 ° C интихоб кардан мумкин аст.Барои намунаҳои ДНК, раванди транскрипсияи баръаксро рад кардан мумкин аст.
2) б.Дар ҳолатҳои махсус ҳарорати гармкунӣ/тавсияро мувофиқи арзиши ибтидоии Tm танзим кардан мумкин аст, тавсия дода мешавад 60°C.
Қайдҳо
1. Ин маҳсулот танҳо барои тадқиқот аст.
2. Лутфан, барои бехатарии худ бо куртаҳои лабораторӣ ва дастпӯшакҳои якдафъаина амал кунед.
