Полимеразаи ваҳшӣ Так ДНК
Так ДНК Полимераза як полимеразаи термостабли ДНК аз Thermus aquaticus YT-1 мебошад, ки дорои фаъолияти 5'→3' полимераз ва фаъолияти эндонуклеазаи 5' флап мебошад.
Компонентхо
| Компонент | HC1010А-01 | HC1010А-02 | HC1010А-03 | HC1010А-04 |
| 10 × Буфери Taq | 2 × 1 мл | 2×10 мл | 2×50 мл | 5×200 мл |
| Так ДНК Полимераза (5 U/μL) | 0,1 мл | 1 мл | 5 мл | 5×10 мл |
Ҳолати нигоҳдорӣ
Интиқол дар зери 0 ° C ва дар -25 ° C ~ -15 ° C нигоҳ дошта мешавад.
Таърифи воҳид
Як воҳид ҳамчун миқдори ферменте муайян карда мешавад, ки дар давоми 30 дақиқа дар ҳарорати 75 ° C 15 нмол dNTP-ро ба маводи ҳалнашавандаи кислота дохил мекунад.
Назорати сифат
1.Таҳлили тозагии сафеда (SDS-PAGE):Тозагии полимеразаи Taq DNA ≥95% тавассути таҳлили SDS-PAGE муайян карда шуд.
2.EndФаъолияти онуклеаз:Ҳадди ақал 5 U полимеразаи Taq DNA бо 1 мкг λDNA барои 16 соат дар 37 ℃ боиси таназзули ошкоршавандае, ки муайян карда мешавад, ба вуҷуд намеояд.
3.Фаъолияти экзонуклеаза:Ҳадди ақал 5 U полимеразаи Taq DNA бо 1 мкг λ -Hind Ⅲ ҳазми ДНК дар тӯли 16 соат дар 37 ℃ боиси таназзули ошкоршавандае, ки муайян карда мешавад, ба вуҷуд намеояд.
4.Фаъолияти Nickase:Ҳадди ақал 5 U полимеразаи Так ДНК бо 1 мкг pBR322 ДНК барои 16 соат дар 37°C боиси таназзули ошкоршавандае, ки муайян карда мешавад, ба вуҷуд намеояд.
5.Фаъолияти RNase:Ҳадди ақал 5 U полимеразаи Так ДНК бо 1,6 мкг MS2 РНК дар давоми 16 соат дар 37°С боиси таназзули ошкоршавандае, ки муайян карда мешавад, ба вуҷуд намеояд.
6.E. coliДНК:5 U аз полимеразаи Taq DNA барои мавҷудияти ДНК-и геномии E. coli бо истифода аз TaqMan qPCR бо праймерҳои мушаххас барои макони E. coli 16S rRNA тафтиш карда мешавад.Ифлосшавии ДНК-и геномии E. coli ≤1 Нусха аст.
7.Амплификацияи PCR (5,0 кб Lambda DNA)- Реаксияи 50 мкл, ки дорои 5 нг ДНК-и Ламбда бо 5 воҳиди Taq DNA Polymerase барои 25 давраи пурзӯрсозии ПТР ба ҳосили 5,0 кб дар назар аст.
Танзимоти реаксия
| Компонентхо | Ҳаҷм |
| Шаблон ДНКa | ихтиёрӣ |
| 10 μM Primer Forward | 1 мкл |
| 10 μM Primer баръакс | 1 мкл |
| Mix dNTP (ҳар кадомаш 10 мм) | 1 мкл |
| 10 × Буфери Taq | 5 мкл |
| Так ДНК полимеразаб | 0,25 мкл |
| Оби бенуклеаз | То 50 мкл |
Эзоҳҳо:
1) Консентратсияи оптималии реаксияи қолибҳои гуногун гуногун аст.Дар ҷадвали зерин истифодаи қолаби тавсияшудаи системаи реаксияи 50 μL нишон дода шудааст.
| ДНК | Маблағ |
| Геномӣ | 1 нг-1 мкг |
| Плазмид ё вирусӣ | 1 саҳ-1 нг |
2) Консентратсияи оптималии Taq DNA Polymerase метавонад дар барномаҳои махсус аз 0,25 μL~1 μL бошад.
РеаксияБарнома
| Қадам | Ҳарорат(°C) | Вақт | Сиклҳо |
| Денатуратсияи ибтидоӣa | 95 ℃ | 5 дақиқа | - |
| Денатуратсия | 95 ℃ | 15-30 с | 30-35 Циклхо |
| Табобатб | 60 ℃ | 15 с | |
| Васеъ | 72 ℃ | 1кб/дақ | |
| Васеъкунии ниҳоӣ | 72 ℃ | 5 дақиқа | - |
Эзоҳҳо:
1) Ҳолати ибтидоии денатуратсия барои аксари аксуламалҳои амплификация мувофиқ аст ва онро мувофиқи мураккабии сохтори қолаб тағйир додан мумкин аст.Агар сохтори қолаб мураккаб бошад, вақти пеш аз денатуратсияро метавон то 5 - 10 дақиқа дароз кард, то таъсири ибтидоии денатурататсия беҳтар карда шавад.
2) Ҳарорати гармкуниро мувофиқи арзиши Tm-и праймер танзим кардан лозим аст, ки одатан ба 3 ~ 5 ℃ камтар аз арзиши Tm-и праймер муқаррар карда мешавад;Барои қолибҳои мураккаб, барои ба даст овардани амплификатсияи самаранок, ҳарорати гармкуниро танзим кардан ва вақти тамдидро дароз кардан лозим аст.
